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目的分析二期梅毒、潜伏梅毒、神经梅毒患者外周血中自然杀伤细胞(NK细胞)及其亚型、IFN-γ+的NK细胞百分比,研究NK细胞在梅毒螺旋体感染中发挥的作用,探讨NK细胞在梅毒螺旋体慢性化感染中的可能机制。方法1.外周血中NK细胞及其亚型的检测:收集健康志愿者10例,梅毒患者40例,其中包括二期梅毒患者14例,潜伏梅毒患者12例,神经梅毒患者14例。获得上述健康对照和患者的外周血并分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),应用流式细胞术检测CD8+T细胞、NKT细胞和NK细胞及其亚型的百分比,及NK细胞表面受体CD158a和CD158e1的表达。2.NK细胞功能的检测:分别收集5例健康对照和8例二期梅毒患者的外周血,分离PBMC,并用MACS分选外周血CD3-CD56+NK细胞,用K562细胞刺激NK细胞,用流式细胞术检测IFN-γ+NK细胞和Granzyme B+NK细胞的百分比。进一步将NK细胞与K562细胞以不同的比例(分别为1:1,10:1,30:1)混合培养8小时后,用流式细胞术检测不同效靶比下NK细胞对K562细胞的杀伤效率。3.统计分析:运用SPSS17.0统计分析软件对数据进行分析,用平均值±标准差表示各组数据,未配对的两组间实验数据比较用曼-惠特尼检验,配对样本两组间比较用t检验。P<0.05视为差异有统计学意义。结果1.二期梅毒患者、神经梅毒和潜伏梅毒患者外周血CD3-CD56+NK细胞百分比分别为(42.42±4.16)%,(48.39±4.81)%,(46.87±5.1)%,与正常对照组[(66.64±3.58)%]相比均显著降低(P=0.0035,P=0.01,P=0.006)。二期梅毒患者外周血中CD3+CD56+NKT细胞百分比[(6.58±0.72)%]显著低于正常对照组[(11.6±1.67)%,P=0.006];潜伏梅毒和神经梅毒患者外周血中CD3+CD56+NKT细胞的百分比与正常对照组相比无统计学差异(P=0.76,P=0.09)。二期梅毒、神经梅毒和潜伏梅毒患者外周血CD8+T细胞的百分比与正常对照组相比均无统计学差异(P=0.27,P=0.09,P=0.46)。2.二期梅毒患者外周血CD3-CD56dimNK细胞的百分比为(38.9±4.19)%,与正常对照组[(54.9±5.9)%]相比显著降低(P=0.03)。神经梅毒和潜伏梅毒患者外周血CD3-CD56dimNK细胞的百分比与正常对照相比无统计学差异(P=0.21,P=0.17)。与正常对照相比,二期梅毒病人和神经梅毒病人外周血CD3-CD56dim CD16-NK细胞百分比下降,且有统计学差异(P=0.016,P=0.0105)。二期梅毒、神经梅毒和潜伏梅毒患者外周血CD3-CD56dimCD16dimNK细胞百分比降低,且有统计学差异(P=0.001,P=0.003,P=0.02)。二期梅毒患者外周血CD3-CD56-CD16dim NK细胞和CD3-CD56-CD16brightNK细胞百分比显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.01,P=0.04)。二期梅毒、神经梅毒和潜伏梅毒患者外周血CD3-CD56brightNK细胞的比例与正常对照组相比无统计学差异(P=0.11,P=0.19,P=0.06)。3.用K562刺激外周血PBMC后,二期梅毒和神经梅毒患者外周血IFN-γ+NK细胞的比例分别为(4.88±0.65)%和(4.59±0.98)%,与正常对照组[(9.45±1.75)%]相比均显著降低(P=0.0002,P=0.0015)。潜伏梅毒组外周血IFN-γ+NK细胞的比例与正常对照相比无统计学差异(P>0.05)。同样,二期梅毒和神经梅毒患者IFN-γ+的CD3-CD56dimNK细胞、CD3-CD56brightNK细胞比例低于正常对照组。用K562细胞刺激纯化的NK细胞,二期梅毒患者IFN-γ+NK细胞比例[(3.127±0.46)%]显著低于正常对照组[(5.504±0.69)%,P=0.01];二期梅毒患者Granzyme B+NK细胞的比例与正常对照组相比无统计学差异。在NK细胞杀伤功能实验中发现,在效靶比1:1、10:1和30:1时,二期梅毒杀伤K562细胞的能力与正常对照组相比均无统计学差异。加入CD158a抗体封闭后,IFN-γ+NK细胞比例比未加CD158a抗体封闭组增多,但两者之间无统计学差异(P=0.11)。结论1.梅毒患者外周血NK细胞总的百分比减少,其中以细胞毒性NK细胞亚型百分比减少为主,而免疫功能不完善的NK细胞亚型百分比增多,提示梅毒螺旋体感染可降低机体内NK细胞的功能。2.梅毒患者外周血IFN-γ+NK细胞百分比降低,提示梅毒螺旋体可能抑制了NK细胞分泌细胞因子IFN-γ的能力,从而降低了NK细胞调节细胞免疫应答的能力。3.梅毒螺旋体感染导致NK细胞的数量减少和功能受损,NK细胞的免疫能力减低,从而导致机体不能完全清除梅毒螺旋体,引起慢性化的感染。