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目的:探讨瘦素对氯化锂-匹鲁卡品致新生期惊厥大鼠远期神经行为、二次打击后惊厥阈的影响及其干预机制。方法:5日龄(Postnatal days 5,P5)的Sprague-Dawley(SD)大鼠共50只,随机分为四组,即:单纯对照组(Control组)、瘦素对照组(Leptin组)、单纯惊厥组(Recurrent seizures,RS组)及瘦素惊厥组(RS+Leptin组),其中Control组和Leptin组各10只,RS组和RS+Leptin组共有备用大鼠30只,RS组和RS+Leptin组共30只大鼠于P6予氯化锂(5mEq/kg)腹腔注射,24h后即P7予匹鲁卡品(320mg/kg)腹腔注射,匹鲁卡品注射前30min予氢溴酸东莨菪碱(1mg/kg)腹腔注射拮抗其副作用。注射完成后观察大鼠惊厥发作情况,从造模成功的大鼠中随机取出20只再随机分配到RS组和RS+Leptin组中(n=10/组)。P8起Leptin组及RS+Leptin组大鼠每日予瘦素(4mg/kg)腹腔注射,连续7d。于P23、P30对四组大鼠进行神经反射测评(平面翻正实验、前肢悬吊实验、负向趋地实验、悬崖回避实验)及认知情绪测评(旷场试验)。于P28~P33行Morris水迷宫监测学习记忆能力。四组大鼠于P34均腹腔注射青霉素(剂量为5.1×10~6U/kg/d)构建二次打击模型,记录青霉素注射后大鼠首次出现惊厥发作的时间(惊厥阈),观察时间为1h。观察结束后取脑组织,Neo-Timm’s染色法观察海马苔藓纤维发芽的情况,蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测皮层、海马锌离子转运体3(ZnT3)及钙结合蛋白D28k(CB-D28k)的表达。结果:1.神经反射测评结果显示,(1)前肢悬吊时间:P23、P30四组大鼠前肢悬吊时间存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组前肢悬吊时间明显缩短(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组前肢悬吊时间明显延长(P<0.05);(2)平面翻正、负向趋地及悬崖回避反射时间:P23、P30四组大鼠平面翻正反射、负向趋地反射及悬崖回避反射时间存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组平面翻正反射、负向趋地反射及悬崖回避反射时间明显延长(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组前平面翻正反射、负向趋地反射及悬崖回避反射时间明显缩短(P<0.05)。2.旷场实验测评结果显示,(1)延迟时间:P23、P30四组大鼠延迟时间存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组延迟时间明显延长(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组延迟时间明显缩短(P<0.05);(2)开场得分:P23、P30四组大鼠开场得分存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组开场得分明显降低(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组开场得分明显升高(P<0.05)。3.Morris水迷宫实验结果显示,(1)定位航行实验:P28~P32,四组大鼠逃避潜伏期逐渐缩短,训练天数之间的逃避潜伏期存在显著性差异[F(3,12)=53.70,P<0.0001],四组大鼠组间的逃避潜伏期存在显著性差异[F(4,12)=84.98,P<0.0001]以及组间因素与训练天数的交互作用存在显著性差异[F(12,80)=1.95,P<0.05]。在P29~P32共4天的定位航行实验中进行两两比较,与Control组相比,RS组逃避潜伏期时间明显延长(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);(2)空间探索:P34四组大鼠穿越平台次数存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组穿越平台次数明显减少(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组穿越平台次数明显增多(P<0.05)。4.二次打击后惊厥阈测定结果显示:P34四组大鼠惊厥阈存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组大鼠惊厥阈较明显降低(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组大鼠惊厥阈明显升高(P<0.05)。5.Neo-Timm’s染色结果显示:四组大鼠海马CA3区、齿状回苔藓纤维发芽评分均存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组海马CA3区、齿状回苔藓纤维发芽评分明显升高(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组海马CA3区、齿状回苔藓纤维发芽评分明显降低(P<0.05)。6.Western blot结果显示:(1)ZnT3在四组大鼠大脑皮层、海马组织中的表达存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组大脑皮层及海马组织中ZnT3的表达量明显增加(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组皮层及海马组织中ZnT3的表达量明显减少(P<0.05)。(2)CB-D28k在四组大鼠大脑皮层、海马组织中的表达存在组间显著性差异(P<0.05),与Control组相比,RS组大脑皮层及海马组织中CB-D28k的表达量明显减少(P<0.05),与RS组相比,RS+Leptin组皮层及海马组织中CB-D28k的表达量明显增加(P<0.05)。7.相关性分析结果显示,(1)皮质中ZnT3与CB-D28K表达量之间存在明显的负相关关系(r=-0.682,P=0.003<0.05);(2)海马中ZnT3与CB-D28K表达量之间也存在明显的负相关关系(r=-0.552,P=0.012<0.05);(3)皮层与海马中ZnT3的总表达量与CB-D28k的总表达量之间同样存在明显的负相关关系(r=-0.596,P=0.00005<0.05)。结论:1.瘦素对氯化锂-匹鲁卡品致新生期惊厥大鼠的远期神经行为及海马苔藓纤维发芽有改善作用。2.氯化锂-匹鲁卡品致大鼠惊厥模型的基础上于P34腹腔注射青霉素可以构建二次打击模型,瘦素干预可以提高惊厥大鼠的惊厥阈。3.惊厥后瘦素干预可以降低惊厥大鼠皮质及海马组织中ZnT3的表达、增加CB-D28k的表达,两种分子表达量之间存在明显的负相关关系。4.本研究提示:瘦素对氯化锂-匹鲁卡品致新生期惊厥大鼠的脑保护作用可能是通过下调ZnT3的表达而上调CB-D28k的表达实现的。