痰瘀互结型耳鸣患者临床特征及痰瘀大鼠耳鸣动物模型神经递质及炎性因子表达的研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liwang0113
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目的:结合临床证候资料研究耳鸣证型分布规律;分析痰瘀互结型耳鸣患者人群特征;建立痰瘀互结证耳鸣大鼠模型,并进行模型评估及中枢机制研究。方法:1.第一部分:收集2017年6月21日-2019年8月20日就诊于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院耳鼻咽喉科耳鸣专科特需门诊的特发性耳鸣患者276例,完成基本资料和证候问诊量表信息采集,进行系统聚类分析。2.第二部分:从上述276例耳鸣患者中选择符合要求的病例236例进行痰瘀互结型耳鸣患者特征聚类,根据聚类结果进行回顾性分析,研究痰瘀互结与非痰瘀互结型耳鸣患者基本信息,血液指标、THI及TEQ量表等信息。3.第三部分:将40只成年Wistar大鼠随机分为4组:对照组(CON组)、水杨酸注射组(SA组)、痰瘀组(TY组)、痰瘀+水杨酸注射组(TYSA组)。(1)痰瘀证模型建立:对TY及TYSA组给予高脂饲料饲养,并进行冰水游泳及0.1%肾上腺素皮下注射实验,CON及SA组给予普通饲料饲养,SA组同时给予0.9%生理盐水皮下注射;饲养过程中观察记录大鼠形态学及行为学特征,进食、饮水量,体重,并计算Lee指数;1个月后采集各组大鼠血液进行血脂及出、凝血时间检测。(2)耳鸣模型建立:SA及TYSA组大鼠附加给予10%水杨酸腹腔注射(175mg/kg,每天一次),TY组大鼠附加给予0.9%生理盐水腹腔注射(175mg/kg,每天一次),其余干预措施继续,1个月后各组进行脉冲前抑制(PPI)及间歇惊跳反射(GPIAS)检测耳鸣模型。(3)中枢机制研究:耳鸣造模结束后,立即取大鼠脑组织,进行Western Blot实验,检测各组大鼠TNF-α、IL-6及GABA-B1、5-HT2C受体蛋白在下丘脑及耳蜗核的表达水平。结果:1.第一部分:耳鸣以中老年双耳鸣为主,证型归纳为肝郁脾虚、肾精亏损及痰瘀互结型。2.第二部分:痰瘀互结证耳鸣患者具有安静尤甚、耳鸣如蝉、时轻时重、按之尤甚、脉弦、突起耳鸣、舌红、黄厚腻苔、舌下络脉曲张、口渴多饮、口渴咽干、脉滑、少腹胀满等高频证候表现,以“安静尤甚、脉弦、舌红苔黄腻、舌下脉络瘀曲”为高相关证候。痰瘀耳鸣患者与“BMI指数>28”强相关,与“年龄>50岁、病程>6月、24<BMI<28、双耳鸣”弱相关;痰瘀耳鸣患者BMI明显高于非痰瘀互结组(P<0.001);痰瘀耳鸣患者C、E、F评分及THI总分均高于非痰瘀耳鸣组,但只有E评分的差异具有统计学意义(P<0.05),痰瘀耳鸣组TEQ等级主要是Ⅱ-Ⅲ级,非痰瘀耳鸣组是Ⅰ-Ⅲ级,两组等级分布构成差异无统计学意义(P>0.05);痰瘀耳鸣组MPV、PDW、P-LCR值高于非痰瘀耳鸣组(P<0.05或P<0.01);痰瘀耳鸣组LDL高于非痰瘀耳鸣组(P<0.05)。3.第三部分:(1)痰瘀模型评估:与对照组相比,TY及TYSA组大鼠出现灵敏度下降、腹型肥胖、毛发油质多、皮肤瘀点、尾巴瘀点、舌色紫暗、大便湿黏、小便色黄等特征。造模中TY及TYSA组平均总进食量均低于CON组(P<0.05或P<0.01)及SA组(P<0.05),TY及TYSA组平均总饮水量均低于CON组(P<0.05)及SA组(P<0.01);造模中4组大鼠的体重均随造模时间延长而增长,造模后TY及TYSA组体重均低于CON组(P<0.01);TY及TYSA组Lee指数随造模时间延长而升高,造模后TY及TYSA组Lee指数明显高于CON组(P<0.001)及SA组(P<0.001);TY及TYSA组大鼠平均出、凝血时间均明显短于CON组(P<0.001)及SA组(P<0.001);TY及TYSA组大鼠TC、LDL水平高于CON组(P<0.001)及SA组(P<0.001);HDL水平低于CON组(P<0.05或P<0.01)及SA组(P<0.05)。(2)痰瘀耳鸣模型评估:耳鸣造模结束后,各组间大鼠PPI抑制率基本一致(P>0.05);SA组大鼠耳鸣造模后GPIAS抑制率较造模前降低(P<0.01),TYSA组大鼠耳鸣造模后GPIAS抑制率较造模前明显降低(P<0.001),造模后SA组大鼠GPIAS抑制率低于CON组(P<0.05),造模后TYSA组GPIAS抑制率明显低于CON组(P<0.001)、SA组(P<0.05)及TY组(P<0.001)。4组GPIAS抑制率均值比较:TYSA组<SA组<CON组<TY组。(3)蛋白表达分析:TYSA组TNF-α蛋白在下丘脑表达水平高于TY组(P<0.05);TY及TYSA组IL-6蛋白在下丘脑表达水平低于CON组(P<0.05);TYSA组IL-6蛋白在耳蜗核的表达水平高于CON组(P<0.05)及TY组(P<0.05);TYSA组5-HT2C蛋白在耳蜗核表达水平高于CON组(P<0.05)、SA组(P<0.05)及TY组(P<0.05)。结论:1.“痰瘀”是导致耳鸣病的重要中医学致病因素。2.“痰瘀互结”型耳鸣患者具有特定的中医证候特征,多表现为肥胖,性格敏感或易怒,并合并高凝状态的临床表现。3.水杨酸注射“痰瘀互结”证大鼠更易被诱导建立耳鸣动物模型且耳鸣严重程度更高。4.下丘脑TNF-α及耳蜗核IL-6、5-HT2C蛋白表达上调可能是水杨酸诱导建立“痰瘀互结”证耳鸣大鼠模型的病理基础。
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