一个神经系统高表达蛋白BEX1与其相互作用蛋白hSNF5的功能研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yan2541023
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人bex1是从人胎脑cDNA文库中分离获得的一个主要表达于脑和睾丸组织的cDNA克隆,其开放读码框为358bp,编码一个125个氨基酸的蛋白。同源性比较发现,人BEX1蛋白与小鼠Bex1蛋白有较高的同源性,氨基酸一致性为65.89%,与小鼠的另外两个同家族蛋白Bex2和Bex3也有不同程度的同源性,氨基酸一致性分别为69.77%和29.93%。人bex1基因与小鼠bex1,bex2和bex3基因均分别定位于人和小鼠X染色体短臂的22区(Xq22),推测它们的功能有一定的相关性。用Pfam软件对人BEX1蛋白进行结构域分析,未发现已知的结构域。 已有文献报道,在小鼠植入前的胚胎发育过程中Bex1基因在转录水平表达量发生变化,在出生后睾丸的发育过程中表达也有差异,说明这个基因与小鼠的发育相关。基于人BEX1基因与小鼠Bex1基因的同源性,而且它在人脑中高表达,由此推测,人BEX1的功能可能与人脑的发育相关。 我们首先克隆得到小鼠的Bex1基因,检测小鼠不同发育时期胚胎中Bex1 mRNA的表达变化情况,发现它在成年鼠脑中的表达量大大低于小鼠胚胎,说明它确实与小鼠脑的发育相关。用小鼠胚胎进行的整体原位杂交显示,Bex1在神经系统高表达,尤其在前脑和侧脑。用成年小鼠脑切片进行的原位杂交发现,Bex1在神经元中特异性表达,且在海马中的表达量高于其它部位。 因信息学分析未发现已知的功能结构域,为寻找人BEX1基因的功能线索,我们以BEX1全长为“诱饵”蛋白,通过酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白。结果发现,人染色质重塑复合体SWI/SNF的核心成员hSNF5能与BEX1相互作用。为了进一步验证这种相互作用,我们进行了GST—Pull down试验。在大肠杆菌中表达了GST-BEX1融合蛋白,用Sepharose 4B进行亲和层析纯化。同时将hSNF5构建入真核表达载体pcDNA4/myc,转染HeLa细胞后,获得真核表达的带myc标签的hSNF5蛋白。GST-Pull down结果证实,BEX1和hSNF5能在体外结合。此外,免疫荧光共定位试验显示,两者在细胞中
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