烯啶虫胺胶体金免疫层析试纸条的研究

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本论文建立了食品和环境中烯啶虫胺的胶体金免疫层析分析方法,并将其有效应用于食品中水果蔬菜和环境中烯啶虫胺的快速检测。本研究将烯啶虫胺抗血清经亲和层析柱Protein A-Sepharose4B纯化,利用混合酸酐法制备烯啶虫胺包被原(NI-OVA)。选择柠檬酸三钠法制备粒径直径为20nm的胶体金。经过条件的优化,确定胶体金连接抗体的最适pH为9,最佳标记烯啶虫胺多克隆抗体(1mg/mL)的用量为25μL。根据优化用量,标记烯啶虫胺多克隆抗体,制得金标抗体。实验以硝酸纤维素膜(NC膜)为固相载体,羊抗兔二抗和NI-OVA分别作为质控线(C线)和检测线(T线)包被在硝酸纤维素膜上,将金标抗体喷涂在金标垫上,制成烯啶虫胺胶体金免疫层析试纸条。建立了烯啶虫胺胶体金免疫层析分析方法,检测限为80ng/mL,检测时间为10min。实验选取了与烯啶虫胺同属于新烟碱类杀虫剂的3种杀虫剂和7种其他常见的农药进行交叉实验,结果表明其对烯啶虫胺胶体金免疫层析试纸条的快速检测均无明显干扰。选取了环境中的水(自来水和河水)和土壤、蔬菜(黄瓜和番茄)以及果汁(橙汁、葡萄汁、苹果汁)作为检测样品,经过处理,检测限分别为160ng/mL、800ng/g、800ng/g、400ng/mL。本文所建立的烯啶虫胺胶体金免疫层析分析方法与ELISA方法有较好的一致性,证明了烯啶虫胺免疫层析试纸条实验方法的有效性。本研究建立的胶体金免疫层析分析方法属于目测定性、半定量的方法,具有快速、特异性好、稳定的特点。实验结果稳定性高,可用作初筛环境和食品中烯啶虫胺残留的方法,并成为监测农产品种植过程中烯啶虫胺使用情况的有效手段。
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