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松子蛋白是一种适宜的膳食蛋白,含有大量必需氨基酸。研究人员近年对植物蛋白酶解后产生的活性肽产生了浓厚兴趣。松子榨油后残余的松子粕中含有丰富蛋白质,从松子粕中提取蛋白,制备天然活性肽,既可以充分利用松子资源,又能增加松子附加值,有重要研究意义和应用前景。本试验主要从优化松子蛋白提取工艺;筛选最佳松子蛋白水解酶,制备松子抗氧化肽;松子抗氧化肽抗氧化活性（体外和体内）;松子抗氧化肽的分离纯化五个方面进行研究。主要研究结果如下:1.优化松子蛋白提取工艺:本文以云南松子为原料,先使用三辊研磨机研磨成浆,经索氏抽提除去脂肪,过40目筛制得松子粕。然后采用超声波辅助法提取松子蛋白,通过正交试验确定松子蛋白最佳工艺为超声功率800W,超声时间30min,提取pH 9.5,料液比1:30,松子蛋白提取率达67.4%,最后采用碱溶酸沉法制备松子蛋白。2.筛选最佳水解酶,制备松子抗氧化肽:以松子蛋白为底物,采用双酶分步水解法制备松子活性肽,以蛋白质水解度和DPPH·清除率为指标,在胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中筛选出两种最适水解酶。试验确定碱性蛋白酶和胰蛋白酶为最佳酶组合。在底物浓度50mg/mL,温度50℃,加酶量3%,碱性蛋白酶酶解pH为9.0,胰蛋白酶酶解pH为8.0的条件下,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分步各酶解1.5h,制备松子抗氧化肽,经测定松子蛋白水解度达到1 1.3%。3.松子活性肽分离纯化:松子蛋白酶解肽混合物经超滤分离得到三个组分,Fra.1（＜5kDa）、Fra.2（5k～10kDa）和 Fra.3（＞10kDa）,以 DPPH.清除率为指标测定不同分子量的清除自由基能力。结果显示,清除自由基能力为:Fra.1＞Fra.2＞Fra.3。且同一组分中,随着活性肽浓度的增大,清除自由基能力增强。选择高活性组分Fra.Ⅰ进行后续纯化。首先样品流经Q Sepharose XL阴离子交换色谱预装柱后被分成四个组分,按时间顺序分别命名为Fra.1-1、Fra.1-2、Fra.1-3和Fra.1-4,收集四个组分冻干进行活性研究。结果显示,其清除自由基能力为:Fra.1-3＞Fra.1-2＞Fra.1-1＞Fra.1-4。富集高活性组分Fra.1-3进行后续纯化,利用Sephadex G-25凝胶色谱将其分成两个组分Fra.1-3-1和Fra.1-3-2,并分别检测了各组分对DPPH自由基的清除能力。结果显示,其清除自由基能力为Fra.1-3-2＞Fra.1-3-1。采用液相串联二级质谱（LC-MS/MS）对高活性组分进行检测,共鉴定出15条具有潜在抗氧化活性的肽段（1-15）,其氨基酸序列分别为:VEIIANQGNR（Val-Glu-Ile-Ile-Ala-Asn-Gln-Gly-Asn-Arg）;DLTDYLMK（Asp-Leu-Thr-Asp-Tyr-Leu-Met-Lys）;MQIFVK（Met-Gln-Ile-Phe-Val-Lys）;NQIKDK（Asn-Gln-Ile-Lys-Asp-Lys）;EGIPPDQQR（Glu-Gly-Ile-Pro-Pro-Asp-Gln-Gln-Arg）;ESTLHLVLR（Glu-Ser-Thr-Leu-His-Leu-Val-Leu-Arg）;MASVPTK（Met-Ala-Ser-Val-Pro-Thr-Lys）;EMVELPLR（Glu-Met-Val-Glu-Leu-Pro-Leu-Arg）;VIPELNGK（Val-Ile-Pro-Glu-Leu-Asn-Gly-Lys）;LTGMAFR（Leu-Thr-Gly-Met-Ala-Phe-Arg）;VVLIGDSGVGK（Val-Val-Leu-Ile-Gly-Asp-Ser-Gly-Val-Glu-Lys）;IQEAGTEVVK（Ile-Gln-Glu-Ala-Gly-Thr-Glu-Val-Val-Lys）;KDELER（Lys-Asp-Glu-Leu-Glu-Arg）;IKDAVEK（Ile-Lys-Asp-Ala-Val-Glu-Lys）;YNQLLR（Tyr-Asn-Gln-Leu-Leu-Arg）。4.松子抗氧化肽体外抗氧化活性研究:以总还原力、DPPH·清除率、ABTS+·清除率为指标,测定松子抗氧化肽的体外抗氧化能力。结果表明,松子抗氧化肽具有较强的还原力及清除自由基能力,且呈现一定的量效关系。在一定范围内,随着浓度增大其抗氧化能力逐渐增强,与维生素C的差距逐渐减小。5.松子抗氧化肽体内活性研究:通过建立D-半乳糖衰老模型,灌胃不同浓度松子抗氧化肽,以维生素C为对照。观察松子抗氧化肽对小鼠状态的影响,测定小鼠体重,脏器指数变化,脑细胞凋亡率,脑和肝细胞中活性氧类物质,以及血清、肝脏和心脏中GSH-Px、SOD,MDA含量等抗氧化指标。结果表明不同浓度松子抗氧化肽均能够降低脑细胞的凋亡水平以及脑和肝细胞中活性氧含量,保护脑细胞免受损伤。同时还能显著提高小鼠心脏、血清和肝脏中GSH-Px、SOD活力,抑制小鼠心脏、血清和肝脏中MDA产生。