【摘 要】
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本文采用实时定量PCR法和双重荧光免疫标记的方法检测人原发性肝细胞癌组织中β2糖蛋白I蛋白的表达。在体外实验中,采用非放射性电泳迁移率改变分析法以及免疫荧光测定法检测
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本文采用实时定量PCR法和双重荧光免疫标记的方法检测人原发性肝细胞癌组织中β2糖蛋白I蛋白的表达。在体外实验中,采用非放射性电泳迁移率改变分析法以及免疫荧光测定法检测各组细胞中NF-?B的活性。应用免疫共沉淀、Western blot法以及免疫荧光法分析可能参与的激酶和磷酸化的蛋白以及相关的位点。结果表明HBV感染后的人原发性肝癌和癌旁组织中均有β2GPI的mRNA以及蛋白水平的高表达,原发性肝癌β2GPI的表达与癌旁组织和HBV感染的正常肝组织相比有显著差异,提示β2GPI蛋白参与HBV感染后肝癌的发生与发展。体外实验中,乙型肝炎病毒表面抗原蛋白与β2GPI结合能诱发NF-?B较强的活化,且AFP有显著的分泌,说明二者联合能导致肝细胞癌的发生。对二者联合如何诱导I?Bα降解,哪些激酶参与I?B降解过程及I?B的特定磷酸化位点的研究,明确了二者活化NF?B存在经典途径,即I?K-I?B-NF?B信号通路,但同时也发现可能存在Tyr磷酸化的途径。本实验明确了HBsAg蛋白与β2GPI蛋白联合促使NF-?B活化的机制,使乙肝病毒感染促使肝细胞癌发生机制得以进一步阐明,更重要的是它将为寻找抑制NF-?B过度活化的药物及肝细胞癌的基因治疗提供新的理论依据。
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