Olomoucine抑制活化星形胶质细胞对brevican、neurocan表达的影响

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目的:研究星形胶质细胞(astrocyte,Ast)活化后,短蛋白聚糖(brevican)、神经蛋白聚糖(neurocan)的表达变化,探讨brevican、neurocan在星形胶质细胞活化后的关键作用。方法:采用振荡培养法结合差速贴壁法分离纯化培养星形胶质细胞,将得到的第三代星形胶质细胞分为三组,分别为对照组、活化组与抑制组。用含10%FBS的DMEM培养基培养24小时后的星形胶质细胞,为对照组细胞;用含10%FBS的DMEM培养基培养24小时后的星形胶质细胞中加入20ng/ml睫状神经营养因子,为活化组细胞;用20ng/ml睫状神经营养因子加入含10%FBS的DMEM培养基培养24小时后,再加入溶于DMSO的100umol/L Olomoucine,为抑制组细胞。通过免疫荧光化学法观察各组细胞在形态上的变化。分别在12、24和48小时,应用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中brevican、neurocan含量变化,半定量RT-PCR法分析各组细胞间胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及brevicanmRNA、neurocan mRNA的表达变化。结果:(1)与对照组相比,活化后的星形胶质细胞,数量明显增多,胞体变大,突起增加延长,交织成网状。上清液中brevican、neurocan含量在12、24、48小时随着时间的延长逐渐增加,与对照组比较有显著差异(p<0.05)。GFAP mRNA,brevicanmRNA、neurocan mRNA的表达在12、24、48小时随着时间的延长也出现明显增高,与对照组比较有显著差异(p<0.05)。(2)应用Olomoucine干预后的抑制组与活化组相比,星形胶质细胞数量不再增多,胞体变小,突起减少缩短,星形胶质细胞活化被抑制。上清液中brevican、neurocan含量在12、24、48小时随着时间的延长逐渐降低,与活化组比较有显著差异(p<0.05)。GFAP mRNA、brevican mRNA、neurocan mRNA的表达在12、24、48小时随着时间的延长逐渐下调,与活化组比较有显著差异(p<0.05)。结论:1.活化后的星形胶质细胞中brevican、neurocan表达明显上调;2. Olomoucine通过抑制星形胶质细胞活化,可使neurocan、brevican表达相应下调。
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