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口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物急性传染病，近年来，口蹄疫疫情在世界范围内造成了极其严重的经济损失。目前，疫苗接种是唯一能够控制口蹄疫疫情的方法，但疫苗的生产工艺尚存在一些问题。口蹄疫疫苗的分离纯化方法尚停留在活病毒提取阶段，选择性差，产品纯度较低，难以适应新型灭活病毒疫苗的生产需要。针对以上问题，本论文尝试建立一种能够适用于工业生产的新型色谱分离纯化工艺，主要包括以下内容: (1)筛选了离子交换色谱以及凝胶过滤等分离介质，得到了分离效果较好的色谱介质;并通过合理组合建立了Sephacryl-S400凝胶过滤色谱偶联DEAESepharose FF离子交换色谱的纯化工艺。该工艺口蹄疫灭活病毒的纯化倍数达到217倍，收率为37.5％。 (2)筛选了疏水层析色谱以及凝胶过滤等分离介质，得到了分离效果较好的色谱介质;根据介质筛选结果，建立了Butyl Sepharose4FF疏水色谱结合Superdex200凝胶过滤色谱的纯化工艺，该工艺口蹄疫灭活病毒的纯化倍数达到247倍，口蹄疫病毒的收率为75.4％，宿主DNA的去除率达到99.5％。 (3)运用多种检测方法对病毒灭活病毒纯品的结构和形态进行鉴定，通过凝胶过滤高效液相色谱偶联多角度激光散射仪检测其分子量，发现完整的病毒的分子量为5.6*107 Da;同时波长扫描发现其最大吸收波长为259nm，均与文献报道一致;通过激光粒度仪进一步对口蹄疫灭活病毒的直径进行检测，发现其直径为28nm;透射电镜观察结果表明，口蹄疫灭活病毒为30 nm左右的球形颗粒，其形态大小与通过蔗糖密度梯度离心所制备的标准品一致。 本论文建立了新型口蹄疫灭活疫苗的分离纯化工艺，该工艺具有能耗少、回收率高、适合工业应用的特点，同时所得口蹄疫灭活疫苗产品的纯度高，结构完整;为大规模制备口蹄疫灭活病毒疫苗奠定了基础。