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结直肠癌已成为全球关注的健康问题,不仅仅严重的影响到我们中国人的身体健康,在国外结直肠癌也是一种高发病的疾病,每年都有一大批的患者死于该病。角质细胞因子(KGF)作为一种典型的生长因子,在我们实验室的前期实验中已经证明了其对肠道具有明显的保护作用,已明确的是在肠道上皮细胞增殖方面具有重要的作用。近来研究显示,KGF和KGFR显著的高表达于人的结直肠癌组织中。进一步研究表明,高表达的促有丝分裂生长因子(FGF)能够通过自分泌或旁分泌的方式促进癌细胞的增殖。此外,在老鼠的成纤维细胞中,FGF能够调控AhR的表达。由此,我们推测在结直肠癌组织中高表KGF和AhR,并且KGF的刺激能够上调及活化AhR,在此基础上我们对AhR介导KGF促进结直肠癌细胞增殖的机制进行了探讨。一、材料方法1、从新桥医院普通外科获取12例结直肠癌病人的临床样本。并用荧光定量PCR检测12例结直肠癌病人癌组织和对应正常组织中KGF、AhR、CYP1A1的表达水平。采用免疫组化技术定位AhR在正常组织和癌组织中的分布情况。2、用KGF作用LoVo和T84两种结直肠癌细胞株24 h后,MTT被用来检测癌细胞的增殖,流式细胞学被用来检测细胞周期的变化,免疫荧光、蛋白免疫印迹、荧光定量PCR检测AhR、CYP1A1的表达变化。3、化学干扰掉两种结直肠癌细胞株中的AhR并饥饿处理24h后,KGF继续作用癌细胞24h,MTT被用来检测癌细胞的增殖,流式细胞学被用来检测细胞周期的变化,免疫荧光、蛋白免疫印迹、荧光定量PCR检测CyclinD1、pRb、CYP1A1的表达变化。二、主要结果:1、12个临床结直肠癌病人样本中,有11个癌症病人的样本组织中KGF的mRNA水平是高表达。体外实验中KGF能够显著的促进结直肠癌细胞株的增殖和S期细胞数。2、12个临床结直肠癌病人样本中,有11个癌症病人的样本组织中AhR的mRNA水平是高表达,并且有8个癌症病人的样本中CYP1A1的mRNA水平高表达。在所检测的癌组织和正常组织样本中AhR大量分布于上皮细胞中。3、在体外培养的LoVo和T84细胞株中,KGF的刺激能够显著促进AhR和CYP1A1mRNA和蛋白水平的表达,同时免疫荧光也进一步证实了这一点。4、在KGF促进结直肠癌细胞增殖方面,KGF能够显著的促进癌细胞株的增殖,通过干扰AhR后,这一促进作用被明显的抑制。5、细胞周期蛋白CyclinD1控制着细胞进程的关键点,我们实验发现KGF能够促进LoVo和T84两种癌细胞株中CyclinD1的表达,然而干扰掉AhR后,Cylin D1的表达明显的被抑制。6、CyclinD1控制着细胞周期从G1期进入S期,从而促进细胞的增殖,进一步实验发现,KGF能够显著的促进细胞周期进入S期,然而AhR干扰后,抑制了细胞周期从G1期进入S期,进而抑制了KGF对癌细胞的增殖。三、结论:KGF能够促进结直肠癌细胞的增殖,并且AhR在其中伴有重要的作用。AhR通过KGF/AhR/CyclinD1这条通路参与KGF对癌细胞的增殖。这一发现首次报道了KGF/AhR/CyclinD1这条通路参与KGF对癌细胞的增殖,表明了AhR在结直肠癌细胞的增殖方面具有重要的作用。