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目的:研究中药复方QHF对人肝癌HepG2细胞侵袭转移的抑制作用及可能的机制,为寻找有效的抗肝癌转移药物和治疗靶点提供实验依据。
方法:以不同浓度的QHF(QHF1-5)干预HepG2细胞,MTT法观察QHF对HepG2细胞的增殖抑制作用;采用细胞划痕实验定性的观察QHF对HepG2细胞迁移的影响;在此基础上,利用Transwell实验,小室包被Matrigel基质胶,体外模拟基底膜,进行迁移和侵袭实验,定量观察QHF对HepG2细胞迁移和侵袭能力影响。Western blot检测QHF对MAPK信号通路的影响,分别使用ERK、p38、JNK抑制剂后观察QHF对HepG2细胞侵袭转移的影响。Elisa方法检测MMPs家族MMP-2、MMP-9和MMP-13水平的变化。
结果:1.MTT实验结果:不同浓度的QHF作用于人肝癌HepG2细胞24h、48h、72h 后,细胞出现增殖抑制,并且这种抑制作用具有剂量依赖性。随着 QHF 浓度的不断增加,其对 HepG2细胞的增殖抑制作用更明显:不同浓度之间均有差异,且随着QHF浓度的增加,抑制率不断增加(p<0.05)。不同时间组之间也有差异,各浓度组24h的抑制率均大于48h,72h组抑制率最大。药物作用24h在QHF1-QHF3浓度内,其对细胞的生长增殖影响较小,其抑制率为 14%-22%,因此选择这三个浓度进行细胞侵袭转移实验的研究。
2.QHF抑制人肝癌HepG2细胞运动的实验研究:划痕实验结果显示:QHF干预组划痕损伤区发生迁移的细胞数目明显少于正常对照组,提示QHF有抑制HepG2细胞迁移的趋势;Transwell迁移和侵袭性实验结果显示:与正常对照组比较,QHF各干预组穿过膜的细胞数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。
3.QHF对MAPK信号通路的影响:Western blot结果显示,QHF干预肝癌HepG2细胞24h后,p-ERK的表达明显下降,p-p38和p-JNK的表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),但ERK、p38及JNK的总蛋白量基本不变。而分别使用ERK、p38 和JNK抑制剂后,侵袭实验结果发现,ERK 抑制剂和QHF发挥协同作用,而 JNK 和 p38 抑制剂部分逆转了QHF抑制肝癌细胞转移的作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。
4.QHF对MMPs分泌的影响:Elisa结果显示:QHF能减少MMP-2的分泌,差异有统计学意义(p<0.05),而对MMP-9和MMP-13的分泌未见明显影响。
结论:中药复方QHF可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及迁移侵袭能力。其抑制HepG2侵袭转移作用可能通过以下机制:(1)影响MAPK信号转导通路,其中包括:活化p38、JNK MAPK,抑制ERK而发挥作用。(2)抑制MMPs的表达,其中与MMP-2有更密切的关系。