耐夫西地酸表皮葡萄球菌的分子特征及生物膜相关研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jifengrgj
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目的:  表皮葡萄球菌是一种在人类皮肤和粘膜以及动物和环境中普遍存在的共生菌,通常情况下不致病。但是,随着植入性医疗设备使用的增加,如导管、心脏瓣膜、血管移植和假体植入等,现在表皮葡萄球菌已成为院内感染的重要病原菌。表皮葡萄球菌可形成生物膜,可抵抗宿主的防御,它能够作为医院感染病原菌主要依赖于其生物膜的形成。夫西地酸(FA)是一个治疗万古霉素耐药葡萄球菌感染的替代药物。然而,随着使用时间的延长,葡萄球菌对夫西地酸抗性有显著的上升趋势。院内感染表皮葡萄球菌分离株的分子分型显示出相当的克隆多样性,并且相关研究要明显少于金黄色葡萄球菌的研究。本文旨在研究从住院患者中分离的表皮葡萄球菌对夫西地酸的耐药率、耐夫西地酸株的分子特征和夫西地酸对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响。  方法:  从温州医科大学附属第一医院2012年1月至2015年12月连续收集的711例住院患者分离的非重复表皮葡萄球菌。通过革兰染色、触酶试验、凝固酶试验和VITEK2全自动微生物分析仪鉴定为表皮葡萄球菌。采用 PCR 技术扩增 mecA检测耐 甲 氧 西 林 表 皮 葡 萄 球 菌 ( methicillin-resistant Staphylococcus Epidermidis,MRSE),采用PCR检测fusB和fusC两种夫西地酸耐药相关基因;采用 K-B 纸片法及MIC琼脂稀释法检测表皮葡萄球菌对10 种常用抗菌药物和夫西地酸的敏感性;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(Multi Locus Sequence Typing,MLST)技术和 eBURST 软件以及葡萄球菌染色体 mec盒(Staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)对表皮葡萄球菌进行序列分型和亲缘性分析。生物膜半定量检测成熟阶段生物膜形成能力,激光共聚焦显微镜观察生物膜形成情况,通过RT-PCR逆转录形成cDNA检测icaA、sarA基因的表达情况。  结果:  在711株表皮葡萄球菌临床分离株中,有55株表现为对夫西地酸耐药,检出率为7.74%(55/711) 。在这55株对夫西地酸耐药的表皮葡萄球菌中有50株为mecA 阳性,判断为 MRSE,阳性率为90.91%;且fusB和fusC耐药基因的阳性率分别为85.45%(47/55)和7.27%(4/55)。对这55株耐夫西地酸表皮葡萄球菌进行药物敏感性试验,发现所有这些细菌对万古霉素敏感,对非β-内酰胺类药物的耐药率超过50%,包括红霉素(80.00%, 44/55),克林霉素(65.45%,36/55)、环丙沙星(60.00%,33/55)、庆大霉素(63.64%,35/55)、复方磺胺甲恶唑(63.64%,35/55),而对利福平的耐药率(47.27%、26/55)和四环素(23.64%,13/55)均小于50%。在这55株耐夫西方地酸表皮葡萄球菌中,MLST分型主要为 ST2(23/55,41.82%),其次为 ST130 (5/55,9.10%)、ST64(4/55,7.27%)、ST59(3/55,5.45%)、ST247(2/55, 3.64%)、ST210(2/55,3.64%)、ST57(1/55,1.82%)以及其他ST型各1株。对耐夫西地酸的表皮葡萄球菌的 ST 型进行 eBURST 分析,发现临床分离株中大部分菌株属于 CC2,占 41.82%(23/55),另 外 15 株细菌属于 CC5,8 株细菌属于 CC247,剩余3 株细菌属于单体;本研究发现的临床分离株的 Founder 是ST5,分析表皮葡萄球菌全球数据库发现 Founder 为 ST2,而 ST5 是 ST2 的SLV。脉冲场凝胶电泳分析结果将目的菌分为20个型,即(A-T)。以Q型为主,共有17株,其中有12株为ST2型;其次为E型,共有7株,ST分型为ST130 3株, ST2 2株,其余为ST248、ST210各1株;其余其他各型1-2株。亚抑菌浓度的夫西地酸能够影响生物膜的形成。  结论:  1.耐夫西地酸表皮葡萄球菌临床分离株呈多样性,但大部分同属于 CC2 群,并且ST2型菌株的耐药谱要较非ST2型广。  2.耐夫西地酸表皮葡萄球菌可能存在院内传播的现象。  3.亚抑菌浓度夫西地酸可抑制表皮葡萄球菌生物膜的形成,但其调控机制不是通过作用于icaA及sarA基因。
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