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甲状腺激素(thyroidhormone,TH)是多效性因子,在脊椎动物尤其在两栖类变态中,对其发育和生理功能等多方面起着非常重要的作用。甲状腺激素产生的生物作用是通过两种亚型的甲状腺激素受体(thyroidhormonereceptorα,TRα和thyroidhormonereceptorβ,TRβ)介导的,甲状腺激素受体是配体依赖型转录因子,属核受体超家族成员。除了在两栖类变态中发挥枢纽作用外,甲状腺激素对鱼类变态也发挥着重要作用。在两栖类变态期间起主导作用的是TRβ,而在鱼类变态中起主导作用的是TRα。
本论文以牙鲆为对象,以18S作内标运用半定量RT-PCR技术探讨了甲状腺激素受体两个异型体TRαA和TRαB在牙鲆不同变态发育阶段的表达规律,结果发现自牙鲆右眼移位开始到移位结束期间(24日龄到45日龄)变态高峰期与TRαA和TRαB表达高峰密切相关,TRαA表现出更强的变态相关性(P<0.001)。
由于实验证实TRαA具有更强的变态相关性,因此对TRαA作了进一步深入研究,通过甲状腺激素T4和硫脲TU处理,并在实验中设置不同浓度梯度,进一步探明了甲状腺激素对变态期牙鲆TRαA基因表达的影响,证实甲状腺激素对变态期牙鲆TRαA有下调节作用。
鉴于TRαA在牙鲆变态发育中的重要作用,运用生物信息学手段对TRαA进行了抗原表位和特征分析,获得了最佳抗原表位侯选肽段,并发现该基因分子中含有两个功能结构—ZnF_C4锌指结构和HOLI结构,二者在调控基因表达活性中发挥着重要的作用。
同时我们在牙鲆中分离了与爪蟾、大菱鲆同源的两个基因arginase(Arg)和deiodinaseiodothyroninetypeⅠ(D1)mRNA部分序列并分析了其序列特征,证实本实验所获得的D1及Arg基因序列是前国内外尚未见报道的牙鲆Ⅰ型甲腺原氨酸脱碘酶和精氨酸酶mRNA部分序列,这些同源基因诱导两栖类和大菱鲆变态,并且可能参与调控牙鲆变态期间一个遗传基因串联系统的表达。
本论文的工作为今后进一步研究和探讨牙鲆变态的分子生物学机理将有一定的指导意义和参考价值。