【摘 要】
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随着我国经济的飞速发展,人民群众的生活水平有了显著提升。而就在繁荣盛世与安居乐业之时,由肥胖而引发的各种疾病却悄然成势。肥胖容易引发各种脂肪代谢性疾病,如II型糖尿病、非酒精性脂肪肝、高脂血症及动脉粥样硬化等,严重威胁人们的身心健康。研究发现,脂滴及脂滴蛋白和上述脂肪代谢性疾病密切相关。脂滴稳态失衡及脂滴蛋白表达异常容易引发脂肪代谢紊乱,进而诱发一系列疾病。Perilipin家族蛋白是脂滴表面最富
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随着我国经济的飞速发展,人民群众的生活水平有了显著提升。而就在繁荣盛世与安居乐业之时,由肥胖而引发的各种疾病却悄然成势。肥胖容易引发各种脂肪代谢性疾病,如II型糖尿病、非酒精性脂肪肝、高脂血症及动脉粥样硬化等,严重威胁人们的身心健康。研究发现,脂滴及脂滴蛋白和上述脂肪代谢性疾病密切相关。脂滴稳态失衡及脂滴蛋白表达异常容易引发脂肪代谢紊乱,进而诱发一系列疾病。Perilipin家族蛋白是脂滴表面最富集的蛋白,在脂滴的生成、降解及结构维护中均发挥至关重要的作用。Pet10p是酿酒酵母中唯一的Perilipin蛋白,但其定位于脂滴的功能区域及对脂滴稳态维护的具体分子机制仍有待进一步明晰。本文旨在探究Pet10p定位于脂滴的分子机制及其互作蛋白,以完善其在脂滴代谢过程中的作用,以及在一定程度上为深入探究高等生物中Perilipin家族蛋白的功能作用奠定基础。实验构建Pet10p的N端及C端Truncations菌株,通过荧光共定位实验检测各肽段与脂滴的定位关系,分析得出,Pet10p对于脂滴的定位需要其头部PAT domain及hydrophobic区域的参与。其次,选取该蛋白中预测无二级结构的C端57个氨基酸短肽分别构建GST及Twin-strep的融合蛋白,并通过Pulldown实验挖掘及验证其互作蛋白,结果得出,pet10(227-283)与长链脂肪酸乙酰辅酶A合成酶Faa1p、Faa4p,高尔基体上参与蛋白分选的AP-1复合物的β亚基Apl2p,新型脂酶Ydr444wp等存在一定的互作关系。最后,pet10(35)菌株的差异蛋白组学分析结果表明,与野生型酿酒酵母BY4741相比,表达量上调(20%)的差异蛋白有189种,主要参与细胞中蛋白质的转运及蛋白复合物的装配、转录调节、代谢调控等生物过程;表达量下调(20%)的差异蛋白有127种,主要参与核酸代谢、线粒体DNA及蛋白代谢、细胞中一些物质合成等生物过程。综上所述,Pet10p定位于脂滴需要其PAT domain及hydrophobic区域的参与,且与pet10(227-283)存在潜在互作关系的蛋白主要有Faa1p、Faa4p、Apl2p及Ydr444wp等。
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