J亚群禽白血病病毒（Subgroup J of Avian leukosis viruS，ALV-J）是90年代初由英国鉴定出来的禽白血病病毒（ALV）新的亚群，主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。近年来该病毒在世界范围内迅速传播。我国于1999年首先在肉用型鸡群中分离鉴定出了ALV-J的中国株（杜岩，崔治中等，1999），并通过接种1日龄雏鸡发现了一株急性转化型毒株。此后，又在中国分离出了更多的毒株（张志，崔治中等，2002）。 网状内皮组织增殖病（reticuloendotheliosis，RE）是指由网状内皮组织增殖病病毒（ReticuloEndotheliosis virus，REV）引起的一群病理综合症。根据病原分离和血清学的结果，表明REV是呈世界性分布的。REV不仅能引起感染禽只生长迟缓、废弃淘汰率升高和死亡，还能引起感染鸡的免疫抑制。 本研究共进行了三个试验。试验1，运用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction PCR）方法扩增并克隆了在中国分离得到的反转录病毒J亚群禽白血病病毒NX0101株的前病毒全基因组序列并完成了序列测定，并与已发表的ALV-J的病毒序列进行比较。根据已报道的ALV-J前病毒基因组序列设计了8对重叠引物，通过PCR方法扩增出ALV-J／NX0101株的不同cDNA片段，分别克隆到DMD18-T载体中，转化受体菌TG1，酶切鉴定阳性克隆，并对阳性克隆测序，最后拼接出NX0101株的全基因组核酸序列。试验2，探索了对REV特异性的杂交瘤细胞株11B154的最佳生长和抗体分泌条件。以每毫升培养液中平均含0.65×10⁶个／ml活细胞起始，于37℃下在含7％CO₂的培养箱中继续培养。在24、48、72和96小时后，每毫升培养液平均总细胞数和活细胞数（百分比）分别是：1.13×10⁶和1.03×10⁶（活细胞占94.5％）、3.42×10⁶和2.48×10⁶（活细胞占72.5％）、2.6×10⁶和0.98×10⁶（活细胞占37.7％）及2.47×10⁶和0.53×10⁶（或细胞占21.5％）。同时用细胞培养上清液对REV感染的鸡胚成纤维细胞作间接荧光抗体试验，在培养24、48、72和96小时后上清液中平均抗体效价分别是1：67、1：133、1：67及1：33。试验3，为了模仿REV垂直感染鸡胚，在1和3日龄的发育SPF鸡胚人工接种不同剂量的REV，并继山东农业大学硕士学位论文续孵化至12日龄。将发育鸡胚制成成纤维细胞单层后，再用抗REV单克隆抗体11Bll8作间接荧光抗体反应检测REV。 试验1结果表明，该毒株的cDNA基因组有7682个碱基，共编码2560个氨基酸。ALv一J的主要基因和基因组功能片段是5’LTR、gag基因、pol基因、env基因、3’LTR，上述各个基因产物及基因组功能片段又包括若干个亚片段。本研究将中国野毒株Nxo 101与英国病毒株HPRS一103及美国病毒株 ADOL一7501的各基因片段做了比较（NX0101与HPRS一103、NX0101与ADOL一7501、HPRS一103与ADOL一7501，以下比较均按此顺序）。5’LTR的核甘酸序列同源性为96.6%、92.9%、93.8%。5’LTR区由U3、R、U5构成，对这三个基因片段进行比较，其同源性分别为94.6%、89.7%、93.8%;100%、100%、100%;95.0%、95.0%、92.5%。5’UTR的核甘酸序列同源性为95.8%、95.0%、94.7%。 gag基因的氨基酸序列同源性为94.7%、94.7%、99.9%。gag基因负责编码病毒内部结构核衣壳蛋白，主要有:p19、pZ、plo、p27、plZ、p15。对gag基因的不同编码产物与即RS一103和ADoL一7501的相应基因序列作比较，其同源性分别为96.1%、92.9%、94.2%;100%、100%、100%;96.8%、98.4%、98，4%;94，1%、95.0%、97.1%;93.3%、92.1%、95.5%:96.0%、96.0%、98.4%。 pol基因编码一种反转录酶，其氨基酸序列同源性为97.7%、97.6%、98.6%。pol基因的编码产物是RTp68和IN p32。对pol基因的不同编码产物做了比较，其同源性为97.2%、97.6%、99.0%;98.9%、97.5%、98.6%。 囊膜蛋白env基因的同源性为91、8%、86.5%、87.6%。env基因由gp85基因和gp37基因组成，对其氨基酸序列作比较，同源性为90.3%、80.1%、83.1%:93.4%、94.4%、91.9%。 3’LTR的核甘酸序列同源性为95.0%、90.6%、94.2%。3’LTR区由U3、R、US构成，对这三个基因片段进行比较，其同源性分别为%.0%、90.7%、93.8%;100%、100%、100%; 91.7%、91.7%、93.6%。 3’UTR基因的核甘酸序列同源性为84.5%、64.8%、91.4%。3’UTR基因包括DRI基因和E二X基因。通过比较发现，NX0101毒株的DRI区吴永平中国株J亚群禽自血病病毒全基因组序列的测定与分析缺失62个碱基，E二X基因缺失65个碱基。由以上分析可知，我国ALV一J/N XO 101株的基因组全序列基本类似于已发表的其它ALv一J病毒株。在比较的三个毒株中，NX0101株与HRPS一103和ADOL7501毒株并不呈现同步变化。ALV一J/NX0101株前病毒全基因序列的测定，这为进一步研究和追踪我国鸡群中ALV一J的演变规律提供了基本的分子数据，也有助于了解中国流行毒株与国际上其他流行株间的演化关系。 试验2结果表明，以培养48小时后，当细胞总数及活细胞总数最高但活细胞百分比开始下降时的培养液中抗体效价最高。该研究结果可作为在细胞培养上大批量生产抗REV单抗的技术参数。 试验3结果表明，从所有人工感染尺EV的鸡胚12日龄制备的成纤维细胞