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RNA沉默是生物（特别是真核生物）细胞抵御外来核酸（病毒、转座子或转基因）入侵以保持生物自身基因组完整性的一种防御机制，在动物RNAi、植物转录后基因沉默及真菌的quelling中都是保守的。RNA介导的病毒抗性是一种转录后基因沉默（post transcriptional gene silencing，PTGS），是近年来发展起来的一种有效防治植物病毒病害的途径，它是以病毒核酸片段为转基因而诱导的基因沉默，不但能将转基因的转录产物降解，而且能将入侵的与转基因同源的病毒基因组RNA降解，具有抗病程度高（近乎免疫）、抗性持久及生物安全性高等优点。 最新的研究证明发生于不同物种上的RNA沉默的直接引发因子都是双链RNA。dsRNA形成的一条有效途径就是将体外构建的反向重复结构（inverted repeats，IR）cDNA引入转基因植株。本研究以马铃薯Y病毒坏死株系外壳蛋白基因的cDNA为模板分别构建5’端茎98bp、50bp（环50bp）和3’端茎50bp（环50bp）的hpDNA，检测茎50bp的反向重复结构对于转录后基因沉默的诱导效应，并且比较PVYN-CP基因5’端和3’端相同片段长度的IR在引发基因沉默方面的差异，为寻找能引发基因沉默的最短有效片段及培育多抗病毒转基因植物提供了依据。具体结果如下： 1．分别克隆PVYN-CP 5’端茎98bp、50bp（环50bp）和3’端茎50bp（环50bp）的hpDNA结构，构建植物双元表达载体pROK-5’98IR、pROK-5’50IR和pROK-3’50IR。 2．将所构建的重组植物表达载体pROK-5’98IR、pROK-5’50IR、pROK-3’50IR、实验室的pROK-3’98IR及空pROKⅡ利用冻融法直接导入农杆菌LBA4404。菌液PCR及酶切鉴定证明质粒均已成功导入农杆菌菌株。 3．叶盘法转化烟草NC89。经卡那霉素对再生植株再次抗性筛选、PCR检测，共获得转pROK-5’98IR的植株128株（T0代），转pROK-3’98IR的植株154株（T0代），转pROK-5’50IR的植株166株（T0代），转pROK-3’50IR的植株126株（T0代），转空pROKⅡ的植株36株（T0代）。 4．转基因植株的抗病性分析，以pVYN的病汁液为接种物，汁液摩擦接种转基因烟草。症状观察及ELISA检测表明不同的转基因植株对PVYN