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目的:肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis related protein 1,LCMR1)的编码基因是我们实验室采用mRNA差异显示技术克隆到的新基因(GenBank ID:AY148462),目前功能不明确,为了研究该基因的功能,我们采用酵母双杂交系统从预转化人肝文库筛选LCMR1的相互作用蛋白,为进一步研究该基因的功能提供线索。方法:(1)PCR扩增pGEX-5T-LCMR1载体中的LCMR1编码区序列,通过引入EcoRI和PstI内切酶位点,将LCMR1编码区克隆到酵母双杂交系统中的pGBKT7载体,得到诱饵质粒pGBKT7-LCMR1,转化酵母菌AH109后,检测BD-LMCR1融合蛋白的表达、LCMR1蛋白的转录激活活性及对宿主菌AH109的毒性;(2)转化了诱饵质粒pGBKT7-LCMR1的酵母菌AH109与转化了人肝文库质粒的酵母菌Y187进行交配培养,利用营养缺陷型培养基,初步筛选阳性克隆;(3)重复检测报告基因的表达和去除阳性克隆中多余的质粒;(4)提取阳性克隆中的质粒DNA,用PCR和酶切的方法减少重复克隆,然后转化大肠杆菌DH5α,利用含氨苄青霉素的LB培养基筛选AD文库质粒转化子,提取AD文库质粒;(5)将pGBKT7-LCMR1质粒和AD文库质粒共转化酵母菌AH109,转化混合物铺板于营养缺陷培养基,再次验证其相互作用;(6)阳性克隆中AD文库质粒测序及生物信息学分析。结果:(1)PCR和测序鉴定pGBKT7-LCMR1载体构建成功,转化AH109,BD-LCMR1融合蛋白成功表达,LCMR1蛋白无转录激活活性和宿主毒性;(2)通过文库筛选得到72个阳性克隆;(3)经报告基因激活检测、多余质粒去除剩余57个克隆;(4)经酶切归类获得30阳性克隆;(5)共转化再次验证相互作用后仍为阳性的克隆有14个,经测序和信息学分析,其中非编码序列7个,编码序列7个,这7个编码序列分别是RPL29、RPS15a、HAMP、补体C3、ND4L、ND1和细胞色素P450。结论:(1)成功构建酵母双杂交系统所需的无转录激活活性、且对酵母菌无毒性的诱饵质粒PGBKT7-LCMR1;(2)通过酵母双杂交系统筛选预转化人肝文库获得了LCMR1蛋白的相互作用蛋白RPL29、RPS15a、HAMP、补体C3、ND4L、ND1和细胞色素P450,为下一步研究的开展打下坚实的基础;(3)LCMR1不仅与肺癌转移相关,很可能还通过与上述蛋白发生相互作用,参与调节了免疫、代谢、蛋白翻译合成等细胞最基本的生命活动。