肺癌转移相关蛋白(LCMR1)相互作用蛋白的初步筛选

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:showwing
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis related protein 1,LCMR1)的编码基因是我们实验室采用mRNA差异显示技术克隆到的新基因(GenBank ID:AY148462),目前功能不明确,为了研究该基因的功能,我们采用酵母双杂交系统从预转化人肝文库筛选LCMR1的相互作用蛋白,为进一步研究该基因的功能提供线索。方法:(1)PCR扩增pGEX-5T-LCMR1载体中的LCMR1编码区序列,通过引入EcoRI和PstI内切酶位点,将LCMR1编码区克隆到酵母双杂交系统中的pGBKT7载体,得到诱饵质粒pGBKT7-LCMR1,转化酵母菌AH109后,检测BD-LMCR1融合蛋白的表达、LCMR1蛋白的转录激活活性及对宿主菌AH109的毒性;(2)转化了诱饵质粒pGBKT7-LCMR1的酵母菌AH109与转化了人肝文库质粒的酵母菌Y187进行交配培养,利用营养缺陷型培养基,初步筛选阳性克隆;(3)重复检测报告基因的表达和去除阳性克隆中多余的质粒;(4)提取阳性克隆中的质粒DNA,用PCR和酶切的方法减少重复克隆,然后转化大肠杆菌DH5α,利用含氨苄青霉素的LB培养基筛选AD文库质粒转化子,提取AD文库质粒;(5)将pGBKT7-LCMR1质粒和AD文库质粒共转化酵母菌AH109,转化混合物铺板于营养缺陷培养基,再次验证其相互作用;(6)阳性克隆中AD文库质粒测序及生物信息学分析。结果:(1)PCR和测序鉴定pGBKT7-LCMR1载体构建成功,转化AH109,BD-LCMR1融合蛋白成功表达,LCMR1蛋白无转录激活活性和宿主毒性;(2)通过文库筛选得到72个阳性克隆;(3)经报告基因激活检测、多余质粒去除剩余57个克隆;(4)经酶切归类获得30阳性克隆;(5)共转化再次验证相互作用后仍为阳性的克隆有14个,经测序和信息学分析,其中非编码序列7个,编码序列7个,这7个编码序列分别是RPL29、RPS15a、HAMP、补体C3、ND4L、ND1和细胞色素P450。结论:(1)成功构建酵母双杂交系统所需的无转录激活活性、且对酵母菌无毒性的诱饵质粒PGBKT7-LCMR1;(2)通过酵母双杂交系统筛选预转化人肝文库获得了LCMR1蛋白的相互作用蛋白RPL29、RPS15a、HAMP、补体C3、ND4L、ND1和细胞色素P450,为下一步研究的开展打下坚实的基础;(3)LCMR1不仅与肺癌转移相关,很可能还通过与上述蛋白发生相互作用,参与调节了免疫、代谢、蛋白翻译合成等细胞最基本的生命活动。
其他文献
目的:子宫肌瘤是女性生殖系统最常见的良性肿瘤,其发病机理至今尚未阐明。本研究通过检测子宫肌瘤组织及同源正常子宫平滑肌组织中14-3-3蛋白各亚型mRNA的表达情况,初步探讨14-3
目的 尽管近年来大肠癌的诊断、治疗手段有了很大进步,但大肠癌的5年生存率仍仅为28%左右,有40%—70%的病人在5年内死于转移与/或局部复发。虽然经过几十年的进步,大肠癌的预后有了
商家拒收现金,只接受移动支付方式,到底有没有违法?随着无现金社会渐成气候,相关争论不绝于耳。一名业内人士向上海证券报记者表示,根据人民币管理条例,商家拒收人民币现金属于违法
报纸
小学数学课堂教学中,无论是教师精心设计的问题情境,还是意味深长的言犹未尽,或是独具匠心的预设生成,都会为师生的教学互动创设很好的空白.艺术留白会产生积极的教学效果,不
慢性咳嗽是儿童常见症状,不同年龄儿童慢性咳嗽的病因构成不同,认识儿童不同年龄段常见的慢性咳嗽病因,对儿童慢性咳嗽的诊断和有效治疗具有重要的意义。
新课标的基本理念之一是十分重视数学的文化价值,强调数学课程应当反映数学的历史、应用及其发展趋势,应当承担向学生传递数学文化的重要职责。高中数学史教学现状如何?高中
目的:探讨Smad4在直肠癌中的表达和血管生成的关系及其临床意义。方法:采用免疫组化S-P法,检测80例直肠癌组织,18例直肠腺瘤组织,20例正常直肠粘膜组织中Smad4、VEGF、MVD的
10月份,国内原镁价格打破前两个月的平稳走势,再次下跌,月跌幅在200元/吨左右。10月国内原镁现货月均价12750元/吨,1~10月国内原镁均价13153.90元/吨,同比下跌11.56%。$$ 10月份
报纸
权益指数年金自从在美国市场上推出后,便迅速发展起来。权益指数年金作为一种指数型年金,本质上是一种递延年金,这类年金保证最低收益,同时保证本金及以前的投资收益不受损失
前言 膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤,占我国常见肿瘤的第八位。其病理类型97%来源于上皮组织,其中绝大多数为移行细胞癌。 膀胱癌的发生、发展是一个多基因、多因素、多