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目的:探讨丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对人脐带间质干细胞(Humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUC-MSCs)生物学特性的影响,为丙烯腈对人体损害机制的研究提供新的视角;研究姜黄素(Curcumin,CUR)对hUC-MSCs生物学特性的影响,探讨姜黄素对hUC-MSCs可能的影响。
方法:(1)采用组织块贴壁法分离培养hUC-MSCs,通过形态学特征、表面标记、成骨诱导等鉴定其生物学特性。(2)用MTT法检测ACN对hUC-MSCs增殖的影响,通过浓度梯度筛选选取0.1μg/mL作为后续试验的作用浓度;成骨诱导分为实验组和对照组,诱导14天后,进行ALP细胞化学染色比较诱导前后的形态学差异,提取细胞总RNA,逆转录成cDNA,通过RT-PCR检测ALP表达水平的差异;分别选择不同浓度ACN作用不同时间后,RT-PCR检测hUC-MSCs细胞因子的表达情况;选择一种抗氧化剂N-乙酰半胱胺酸(NAC)拮抗ACN对hUC-MSCs的损伤,通过MTT法筛选后确定3mMNAC为保护剂量作为后续试验浓度。用3mMNAC预处理hUC-MSCs30min后,分别加入不同浓度的ACN,MTT检测NAC拮抗ACN对hUC-MSCs的氧化作用;流式细胞仪分析ACN对hUC-MSCs凋亡以及细胞周期的影响。(3)MTT法检测CUR对hUC-MSCs增殖的影响;成骨诱导分为实验组和对照组,14天后,进行ALP细胞化学染色,并提取细胞总RNA,逆转录成cDNA,通过RT-PCR检测ALP表达水平的差异;流式细胞仪分析CUR对hUC-MSCs细胞周期的影响。
结果:(1)ACN抑制hUC-MSCs增殖,并且随着浓度增高作用时间延长OD值逐渐减小;成骨诱导14天后,ACN组的ALP阳性率和ALP基因表达明显低于对照组;不同浓度ACN作用不同时间后,处理组的hUC-MSCs因子的表达明显低于对照组。MTT结果表明与对照组相比,NAC预处理组细胞OD值更高;细胞周期和凋亡检测的结果表明ACN组细胞凋亡增加。(3)CUR作用后表明随着CUR浓度的增高,hUC-MSCsOD值减小;成骨诱导后,CUR组细胞ALP阳性率和ALP表达水平均增高;细胞周期检测发现CUR组细胞S期细胞增多。
结论:(1)ACN可以抑制hUC-MSCs的增殖分化,导致细胞发生凋亡,分泌的细胞因子表达减低,造血支持作用受到抑制。(2)CUR抑制hUC-MSCs的增殖,促进成骨分化。