肺癌95D与95C细胞株中转移相关miRNAs的筛选研究

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研究背景:肺癌是目前全球最常见、疾病负担最重的恶性肿瘤。影响肺癌患者治疗效果和预后的关键因素是肺癌的侵袭与转移。转移是一个多因素,多阶段,连续的生物过程。它的发生经过一系列步骤:从原位侵袭开始,接着肿瘤细胞进入血管或淋巴管,在循环中存活,出血管或淋巴管,在远处开始并维持微小转移灶,最后经过血管化作用并增殖形成转移肿瘤。目前研究认为细胞外基质、细胞粘附分子、水解蛋白酶、血管形成的相关分子、转移相关基因及miRNAs等均与肿瘤转移密切相关,这些细胞因子及基因相互影响和制约,影响肿瘤细胞转移的进程。微小RNA(microRNA,简称miRNA)是一类长度约19-24核苷酸的单链非编码RNA。目前研究表明miRNAs广泛参与生物的生理和病理学过程,在细胞分化、增殖、凋亡、新陈代谢、感染,尤其是肿瘤的发生、发展等生物学过程都发挥了重要作用。而转移作为肿瘤的重要生物学特征,其与miRNAs的研究也引起了科学家们的广泛关注。研究报道miRNAs在乳腺癌,肝癌,胃癌,甲状腺癌等肿瘤转移过程发挥了重要作用,但是miRNAs与肺癌转移的相关研究还比较少。本研究拟使用miRNA芯片对不同转移能力肺癌细胞株进行筛选,以找到与肺癌转移相关的miRNAs,为进一步研究miRNAs在肺癌转移机制等研究奠定基础。目的:采用microRNA芯片筛选出肺癌高转移能力95d细胞和低转移能力细胞95c细胞差异表达的miRNAs。方法:常规培养肺癌95d及95c细胞株,取等量95d及95c细胞,用Trizol法分别提取两种细胞的总RNA;用PEG方法分离miRNA,使用T4 RNA连接酶标记方法标记CU-cy3,然后进行miRNA芯片杂交与清洗,芯片扫描,采用LuxScan 3.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号;再根据各张芯片的global mean进行片间校正,最后用Significance Analysis of Microarrays (SAM, version 2.1)挑选差异表达基因。结果:miRNA芯片结果显示,95D细胞相对于95C细胞上调的miRNA有22个:hsa-miR-138-2*, hsa-miR-487a, hsa-miR-151-5p, hsa-miR-125a-3p, hsa-miR-220b, hsa-miR-1229, hsa-miR-125a-5p, hsa-miR-1290, hsa-miR-18a,mmu-miR-1195, hsa-miR-487b, hsa-miR-652, hsa-miR-1285, mmu-miR-700, hsa-miR-663, hsa-let-7g, hsa-miR-222,预测的miRNA有MIR232,MIR196,MIR237,MIR189,MIR191;表达下调的有:mmu-miR-220,hsa-miR-5481。结论:1.miRNA在肺癌高转移能力95d细胞株和低转移能力95c细胞株中存在差异表达miRNAs。2.肺癌高转移能力95d细胞株中表达上调的22条miRNAs可能促进肺癌转移,表达下调的2条miRNAs可能抑制肺癌转移。
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