论文部分内容阅读
本试验采用超声波乙醇浸提法从甲鱼体内粗提VB17,利用HPLC法对提取液进行定性、定量分析;同时通过体内外试验研究VB17被β-葡萄糖苷酶激活的抗肝癌效果,探讨了VB17的抗肝癌机制,为甲鱼抗癌保健品的开发提供研究思路及理论依据。1、利用HPLC法对甲鱼浸提液进行定性、定量分析。结果表明,在乙醇浓度为90%,料液比1:15,超声波温度20℃,超声时间30min的条件下,甲鱼体VB17的含量可达10.46mg/kg。2、体外培养人肝癌HepG2细胞,观测VB17与β-葡萄糖苷酶联合应用诱导细胞凋亡的作用。MTT法检测发现VB17与β-葡萄糖苷酶联合应用的效果要明显的优于VB17单独作用,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,其对HepG2细胞增殖的抑制率增加;显微镜下观察发现随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞开始变圆、皱缩,贴壁细胞的数量越来越少,14mg/mL组细胞已呈现出典型的坏死状;AO/EB荧光染色法观察表明凋亡细胞数随着VB17浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增多,各实验组的细胞凋亡率与对照组相比差异极显著(p<0.01);Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析结果显示细胞凋亡率随VB17浓度增加和作用时间的延长而逐渐增高,VB17添加组的细胞凋亡率与对照组间,存在极显著差异(氏0.01)。3、建立裸鼠HepG2细胞株移植瘤模型,观测VB17体内抑瘤效果。结果表明:高(60mg/mL)、中(30mg/mL)、低(15mg/mL)剂量灌胃组及腹腔注射(60mg/mL)组相对肿瘤体积和瘤重均小于对照组,抑瘤率分别为58.30%、45.64%、5.81%和14.73%,中、高剂量组抑瘤率显著的高于对照组(P<0.01);相同浓度药物,腹腔注射组的抑瘤率显著的低于灌胃组(P<0.01)。4、通过观测裸鼠日常行为和日增重等指标,探讨VB17对机体的毒副作用。结果表明腹腔注射组和低剂量灌胃组与对照组裸鼠比较在日常行为和日增重方面并无显著差异(P>0.05),高剂量灌胃组荷瘤小鼠日增变化较大,比对照组减少了94.09%(P<0.01),比腹腔注射组减少了93.66%(p<0.01)。中剂量灌胃组的日增重与对照组、腹腔注射组和低剂量组相比分别降低了15.69%、20.15%和23.21%(P<0.05)。