超临界流体色谱(supercritical fluid chromatography,SFC)具有高效快速、绿色环保的优点,在天然产物的分离中得到了关注。海风藤是一种富含木脂素、生物碱等成分的藤类药物,其物质基础的研究是更好发挥临床应用的基础。本文以海风藤为研究对象,基于SFC建立快速二维色谱方法,基于手性SFC分离纯化木脂素结构类似物,结合SFC和反相液相色谱(reversed-phase liquid chromatography,RPLC)建立海风藤总体分离方案,评价SFC烷基和苯基固定相,探索SFC分离机理。此系列工作为拓展SFC在天然产物分离分析中的应用奠定基础,也为解决天然产物的分离难题提供技术支持。论文首先建立了 2D RPLC/UHPSFC(ultra high performance supercritical fluid chromatography)方法,对海风藤石油醚(petroleum ether,PE)部位和乙酸乙酯(ethyl acetate,EA)部位进行快速分析。PE和EA部位经RPLC分离分别得到21个组分和28个组分。SFC经条件优化后,可使PE各组分均在2 min内完成分离,EA各组分均在3 min内完成分离,且分离效果良好,充分体现了 SFC快速高效的特点。同时UHPSFC还表现出与RPLC的高度正交性,PE部位和EA部位经63 min和112 min的分析(每次分离包括1 min的平衡时间),分别检测到204个和829个色谱峰。通过该二维体系的分析也更深入地认识到海风藤化学组成的复杂性。论文采用手性SFC用于解决4个木脂素非对映异构体的分离。在CSP-1色谱柱上的分离采用自动连续叠加进样方式,每个循环进样4次,用时32.5 min,经过2次循环可分离710 mg样品,得到组分1(化合物1和2)和组分2(化合物3和4)。采用CSP-2色谱柱同样以自动叠加进样方式,组分1在37 min内,通过14次进样分离得到103.1 mg化合物1和10.0 mg化合物2,组分2在35 min内,通过10次进样分离得到152.3 mg化合物3和178.6 mg化合物4。手性SFC是解决结构类似物分离的有效手段,且不同的手性柱可提供不同的分离选择性,在天然产物分离中具有很好的应用前景。在以上工作的基础上,建立了四个层次的分离策略用于海风藤的系统分离。前两个层次的分离主要是利用SFC高效快速,有机溶剂用量少,后处理简单方便的优势,在SFC上实现样品的快速简化,以解决液相色谱分离中峰容量不足的问题。在SFC的分离主要关注分离稳定性、载样量,制备效率和收集方式;第三层次是利用SFC与RPLC正交性好的优势,通过制备RPLC进行单体化合物的纯化,因此更关注分离选择性问题。第四层次采用手性SFC以解决难分物质的分离问题。以第一次SFC分离的一个组分为示范,采用此分离策略制备得到28个化合物,其中包含5个新化合物。制备SFC成功解决了这种多层次制备中的效率问题,此系统分离方案针对性地解决了复杂样品分离的难点问题。论文建立了不同键合密度的5种C8固定相和2种苯基固定相的LESR(linear solvation energy relationship,LSER)模型。模型参数定量地说明疏水作用随着键合密度的增加而增加,改性剂的种类和比例对各种作用力也有影响。向量夹角的评价说明C8与硅胶固定相的正交性随着键合密度增加而变大,不同键合密度的C8固定相,以及苯基与高键合量C8都有一定的正交性,而且高比例改性剂有利于提高分离选择性。固定相的log k-log k图说明化合物如果能和固定相产生多种作用力有利于调节分离选择性。用硅胶和以上7种固定相分离8个酰胺类生物碱,在硅胶柱上保留更好,C8和苯基分离选择性更好,可以分离不同饱合碳链长度、双键数目,顺反异构的生物碱。论文采用了 SFC技术,解决海风藤快速分析、结构类似物分离以及系统分离的问题,并且评价和拓展非极性固定相在SFC中的应用。论文以SFC为技术手段,开展了海风藤化学成分分离的系统研究工作,对SFC的分离机理、保留规律以及海风藤的化学组成都有了更加深入的认识。