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第一部分金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)在脑膜瘤组织中的表达及与肿瘤生物学特点的相关性研究目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)在脑膜瘤组织中的表达及与肿瘤生物学特点的相关性。方法应用免疫组化方法检测80例脑膜瘤标本中TIMP-3及Ki-67的表达情况,并根据肿瘤的不同生物学特点进行分类。结果TIMP-3蛋白在非侵袭性脑膜瘤中的表达明显高于侵袭性脑膜瘤,在脑膜瘤WHOⅠ级中的表达明显高于WHOⅡ级、Ⅲ级,组间差异均具有显著性差异(p<0.05)。而Ki-67表达则在不同侵袭性脑膜瘤中表达无差异,而与WHO分级有关(p<0.05)。结论TIMP-3在脑膜瘤中的表达与肿瘤侵袭性及WHO分级有关,可能参与脑膜瘤的发生及侵袭过程。第二部分脑膜瘤TIMP-3基因启动子区CpG岛甲基化分析目的探讨脑膜瘤组织中TIMP-3基因启动子区CpG岛甲基化状态与TIMP-3 mRNA表达及肿瘤生物学特点的相关性。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测30例脑膜瘤标本中TIMP-3 CpG岛甲基化状态,用RT-PCR的方法检测TIMP-3基因mRNA的表达情况,并根据肿瘤的不同侵袭性进行分类。结果12例非侵袭性脑膜瘤中均可见TIMP-3基因mRNA表达,18例侵袭性脑膜瘤中7例未见TIMP-3表达,11例可检测到TIMP-3基因mRNA表达。不同侵袭性脑膜瘤间TIMP-3 mRNA含量存在显著性差异(P<0.01)。MSP法在30例脑膜瘤组织中检测出7例(23.3%)存在TIMP-3启动子区CpG岛甲基化,18例侵袭性脑膜瘤中甲基化阳性6例(33.3%),12例非侵袭性脑膜瘤中仅1例检出甲基化条带,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。7例TIMP-3基因存在甲基化的组织中仅1例检测出TIMP-3基因mRNA,6例TIMP-3基因mRNA阴性,TIMP-3甲基化状态与TIMP-3mRNA表达间存在明显负相关关系。结论侵袭性脑膜瘤中TIMP-3启动子区存在异常高甲基化,可能是TIMP-3基因表达下调的重要机制之一。第三部分甲基化抑制剂对脑膜瘤生物学活性的影响目的探讨甲基化抑制剂5-氮-2?-脱氧胞苷对体外培养的脑膜瘤细胞生物学活性的影响,检测脑膜瘤细胞TIMP-3基因甲基化状态及蛋白表达的改变,观察药物对肿瘤细胞生长状态,侵袭能力的影响。方法用5-氮-2?-脱氧胞苷处理体外培养的脑膜瘤细胞,应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测脑膜瘤细胞TIMP-3 CpG岛甲基化状态,Westen Blot方法检测TIMP-3蛋白的表达情况,MTT法检测肿瘤细胞的生长活性,Transwell法检测脑膜瘤的体外侵袭能力。结果5-氮-2?-脱氧胞苷对脑膜瘤细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性,在一定范围内随着剂量的增高和作用时间的延长,对脑膜瘤细胞增殖的抑制作用越明显。MSP方法检测到药物作用后细胞的未甲基化扩增,未检测到其甲基化扩增,表明5-氮-2?-脱氧胞苷逆转了TIMP-3的甲基化状态。Westen Blot方法检测到处理组细胞的TIMP-3蛋白与对照组相比表达量增加。Transwell体外侵袭实验结果显示,5-氮-2?-脱氧胞苷作用后的脑膜瘤细胞的侵袭能力低于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论甲基化抑制剂5-氮-2?-脱氧胞苷作用于体外培养的脑膜瘤细胞,可逆转TIMP-3启动子区CpG岛甲基化状态,上调脑膜瘤细胞中TIMP-3蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的生长活性,并降低肿瘤细胞的体外侵袭能力。