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WRKY是近二十年来在植物中发现的锌指型转录调控因子,它在植物的生长发育、衰老以及对生物与非生物胁迫的响应等生理过程中发挥重要作用。本研究从橡胶树(Hevea brasiliensis)(热研7-33-97)胶乳中克隆了 2个WRKY家族转录因子基因,HbWRKY27和HbWRKY57,并对其序列特征和表达特性进行了分析。此外,通过转基因拟南芥进一步研究了 HbWRKY57基因的生物学功能。主要结果如下:1、从橡胶树胶乳转录组数据库中找到2个WRKY家族成员基因的cDNA序列。设计特异引物,运用RT-PCR技术,克隆了其全长cDNA序列,分别将2个WRKY家族转录因子基因命名为HbWRKY27和HbWRKY57。2、生物信息学分析表明,HbWRKY27基因的开放阅读框(ORF)序列长为1266 bp,编码区GC含量为48.82%,编码的蛋白质由442个氨基酸残基组成;HbWRKY57基因的ORF序列长为921bp,编码区GC含量为49.84%,编码的蛋白质由306个氨基酸残基组成;HbWRKY27和HbWRKY57都具有1个典型的WRKY结构域和1个锌指结构基序,均属于第Ⅱ类WRKY家族转录因子。3、运用实时荧光定量PCR技术,对HbWRKY27和HbWRKY57基因的表达特性进行了分析。在橡胶树不同组织(根、芽、树皮、木质部、叶柄、叶片和胶乳)中,HbWRKY27基因在树皮组织中的相对表达量最高,而在芽中的相对表达量最低;HbWRKY57基因则在木质部中的相对表达量最高,而在叶片中的相对表达量最低;在橡胶树不同发育时期叶片(芽、古铜期、变色期、淡绿期、稳定期、衰老早期、衰老中期和衰老晚期)中,HbWRKY27基因在古铜期的叶片中相对表达量最高,而在变色期的表达量最低;HbWRKY57基因在衰老晚期的叶片中相对表达量最高,而在变色期的叶片中表达量最低;在开割橡胶树不同刀次的胶乳中,HbWRKY27基因和HbWRKY57基因都随着割胶刀次的增加呈上调表达趋势;在外源茉莉酸甲酯(JA)和乙烯利(ET)处理橡胶树的胶乳中,HbWRKY27和HbWRKY57基因都显著上调表达。HbWRKY27和HbWRKY57基因在死皮橡胶树的胶乳和树皮组织具有不同的表达模式。在死皮橡胶树胶乳中,HbWRKY57基因的表达随死皮强度增加而减弱,HbWRKY27基因随死皮强度增加而极显著上调表达;在死皮橡胶树树皮组织中,随着死皮程度增加,HbWRKY27基因呈极显著下调表达,而HbWRKY57基因则呈极显著上调表达。4、分别构建HbWRKY27和HbWRKY57基因的融合表达载体pCAMBIA1302-HbWRKY27 和 pCAMBIA1302-HbWRKY57,利用农杆菌介导法转化烟草,并使用激光共聚焦显微镜对这两个转录因子的亚细胞定位进行了分析。结果表明,这2个转录因子均定位于烟草叶片表皮细胞的细胞核中。5、分别构建HbWRKY27和HbWRKY57基因的融合表达载体pGBKT7-HbWRKY27和pGBKT7-HbWRKY57,并进行酵母双杂交分析。结果表明,HbWRKY27和HbWRKY57编码的蛋白均含有转录激活域,能够与载体中的GAL4DB结合,从而激活报告基因的表达,具有转录因子的转录激活活性。6、获得了转HbWRKY57基因的T3代拟南芥植株,并对其抗逆及种子萌发率等特性进行了研究。结果表明,转HbWRKY57基因的T3代拟南芥植株的抗逆能力明显高于野生型植株,表现出植株长势好、提早开花以及生长周期延长等特点。