非小细胞肺癌患者调节性T细胞表面抑制性分子表达变化和血清脂肪因子水平与疾病进展的关系

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目的检测NSCLC患者外周血和肿瘤组织中CTLA-4、LAG-3、PD-1、LepR和CD39在CD4+T细胞和CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞上的表达水平,并探讨其与NSCLC疾病状态的关系;检测NSCLC患者血清中脂肪因子瘦素、脂联素、抵抗素、PAI-1和可溶性LepR的浓度,探讨瘦素和可溶性LepR在患者血清中的变化水平与Treg细胞之间的关联。方法随机选取新入院NSCLC患者53例、疾病对照17例与健康对照18例,共88个研究对象。取新鲜抗凝血和体外分离手术病人肿瘤组织和瘤旁组织浸润的单个核细胞,经流式细胞术检测CD4+T细胞和CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的比例,以及上述5种抑制性分子/受体的表达变化。用ELISA方法检测血清TGF-β、IL-10、瘦素、脂联素、抵抗素、PAI-1和可溶性LepR的浓度。结果NSCLC患者外周血中CD4+CTLA-4+T细胞(2.79%±2.43%vs1.75%±0.52%和1.56%±0.96%)和CD4+PD-1+T细胞比例(12.94%±5.96%vs10.83%±3.68%和8.96%±2.27%)显著高于正常对照组或疾病对照组;TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者外周血CD4+PD-1+T细胞的比例显著高于Ⅰ~Ⅱ期患者(13.21%%±5.96%vs11.06%±3.42%);肿瘤组织中CD4+CTLA-4+T (5.07%±2.11%vs3.02%±1.35%)和CD4+PD-1+T细胞比例(40.20%±18.84%vs27.82%±16.59%)显著高于自体瘤旁组织;肿瘤组织中浸润CD4+T细胞表达CTLA-4(5.07%±2.11%vs3.13%±1.01%)、 LAG-3的比例(7.86%±3.24%vs2.65%±1.48%)和PD-1(40.20%±18.84%vs15.79%±5.69%)显著高于自体外周血。 NSCLC患者外周血中Treg细胞(9.12%±3.57%vs6.43%±2.48%)、 CTLA-4+Treg (6.01%±4.49%vs2.53%±2.04%)、 LAG-3+Treg(4.89%±4.80%vs1.79%±2.18%)和PD-1+Treg(20.14%±11.57%vs11.68%±5.86%)细胞比例均显著高于正常对照组; TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者外周血Treg(9.78%±2.95%vs8.26%±2.51%)和CTLA-4+Treg细胞(7.15%±2.83%vs5.41%±3.01%)的比例明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者;肿瘤组织中Treg细胞(36.92%±15.11%vs18.87%±8.17%)、CTLA-4+Treg(13.27%±6.63%vs9.31%±5.15%)、LAG-3+Treg(8.99%±3.78%vs6.66%±3.66%)和PD-1+Treg细胞(54.42%±16.96%vs44.25%±13.56%)的比例显著高于自体瘤旁组织;肿瘤组织中浸润的Treg细胞(36.92%±15.11%vs8.78%±2.95%)、 CTLA-4+Treg (13.27%±6.63%vs6.50%±3.61%)、LAG-3+Treg(8.99%±3.78%vs5.04%±3.80%)和PD-1+Treg细胞(54.42%±16.96%vs35.36%±16.39%)比例显著高于外周血。NSCLC患者血清中TGF-β[(20.24±6.08vs14.85±6.17和16.21±5.09)ng/ml]和IL-10[(3.31±1.65vs3.05±1.63和0.57±0.36)pg/ml]浓度显著高于疾病对照和正常对照,TGF-β和IL-10的水平与各自外周血Treg细胞百分比例间未发现相关性。在性别和年龄各组间无统计学差异的情况下,经BMI校正,NSCLC患者血清脂联素浓度显著高于正常对照[(6.08±3.56vs3.87±2.40) ng/ml],抵抗素[(4.26±3.22vs7.71±5.43和8.93±6.67)ng/ml]和可溶性LepR浓度[(223.23±107.77vs363.55±85.09)pg/ml]则明显低于疾病对照和正常对照,瘦素和PAI-1的浓度在三组间均无统计学差异。NSCLC患者外周血和肿瘤组织内LepR+Treg细胞比例分别显著高于正常对照(3.81%±2.52%vs0.89%±0.97%)和自体癌旁组织(6.45%±3.12%vs1.99%±1.61%)。NSCLC患者外周血Treg细胞比例与自体血清瘦素水平呈显著负相关;Treg细胞比例与血清可溶性LepR浓度呈显著正相关;血清瘦素水平与可溶性LepR浓度呈显著负相关;血清Leptin水平与外周血LepR+Treg细胞比例呈明显负相关。对正常对照组和疾病对照组进行上述分析均未发现统计学意义上的相关性。结论NSCLC患者外周血和肿瘤组织内CD4+T细胞及Treg细胞表达CTLA-4、LAG-3和PD-1抑制性分子/受体的比例显著增高,可能是参与肿瘤细胞免疫逃逸、促进疾病进展及预后不良的机制之一。NSCLC患者血清脂联素、抵抗素、可溶性LepR的浓度变化提示脂肪因子可能参与肿瘤的发生和发展;血清中瘦素、可溶性LepR水平与Treg细胞比例、LepR+Treg细胞比例存在的相关性证实瘦素系统对Treg细胞数量和比例的调控作用;对瘦素/LepR-Treg轴进行调节可望成为靶向Treg细胞的一种免疫调控治疗策略,使NSCLC患者获益。
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