【摘 要】
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目的:在乳酸工程菌(Lactococcus lactic NZ9700)中表达人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor, aFGF),制成活菌制剂,并研究该制剂对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱
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目的:在乳酸工程菌(Lactococcus lactic NZ9700)中表达人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor, aFGF),制成活菌制剂,并研究该制剂对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)的治疗作用。方法:构建乳酸菌食品级的表达载体pGMN4-USP45-LEISS-aFGF14-154,利用α-半乳糖苷酶基因筛选出重组子。MTT法检测aFGF 14-154蛋白对Balb/c 3T3细胞促增殖活性。制成活菌制剂分高、中、低剂量,通过比较小鼠的毛色、体重、便血、结肠长度、病变组织的髓过氧化物酶(MPO)活性,以及观察结肠组织病理形态学变化,验证其对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的预防治疗效果。结果:成功构建了乳酸菌食品级表达载体pGMN4-USP45-LEISS-aFGF14-154,电转至乳酸菌NZ9700中,在乳酸链球菌素的自诱导下,可持续表达aFGF,产量为50gg/ml,在体外25-200ng/ml的浓度范围内,aFGF14-154蛋白具有促增殖活性,高剂量活菌制剂对溃疡性结肠炎模型具有很好的治疗效果,表现为改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短,促进组织修复,保持结肠结构的完整性,并下调MPO的活性。结论:构建的乳酸菌食品级表达系统能够很好地表达aFGF14-154连接USP45分泌信号肽的载体能够分泌表达aFGF;连接LEISSTDCA短肽明显增加分泌量。aFGF14-154在体外具有促增殖活性,aFGF14-154乳酸菌活菌制剂对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有明显的改善作用。
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