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目的:乙型肝炎病毒感染是一个全球性健康问题。慢性HBV感染是肝硬化的重要病因,致使肝硬化成为我国常见疾病和导致死亡的主要原因之一。肝纤维化是慢性肝病向肝硬化进展的中间环节。临床上目前HBV相关肝纤维化的治疗方法非常有限。因此,探索HBV相关肝纤维化的分子机制可能为慢性乙型肝炎肝硬化的治疗提供潜在靶点。SATB1是一种组织特异性表达的核基质结合蛋白,主要在胸腺细胞中表达,通过染色质重塑调控基因的表达。SATB1在T细胞发育和活化,以及肿瘤细胞生长转移等方面起到重要作用。本研究拟探索SATB1在HBV相关性肝纤维化中的作用及机制。方法:采用免疫组织化学方法检测58例患者慢性乙型肝炎肝组织和正常肝组织中SATB1的定位及表达情况。建立CC14诱导的HBV转基因鼠肝纤维化模型,使用real-time PCR、western blot、免疫组织化学检测正常和不同程度纤维化小鼠肝组织中SATB1及肝星状细胞活化指标α-SMA的表达。肝细胞株L02分别瞬时转染七种HBV编码基因真核表达质粒及空载体后,real-time PCR检测L02细胞中SATB1的表达,从而筛选调控SATB1表达的HBV编码基因片段。构建并鉴定稳转HBx的肝细胞株,使用real-time PCR、western blot、荧光素酶报告基因检测稳转HBx及空载体的肝细胞中SATB1的表达水平。使用不同信号转导蛋白的抑制剂(ERK抑制剂U0126;p38 MAPK 抑制剂 SB203580;JNK 抑制剂 SP600125;PI3K 抑制剂 LY294002)及对照DMSO处理稳转HBx肝细胞,以阻断细胞中的信号转导途径,real-time PCR和western blot筛选HBx可能调控SATB1表达的信号通路。在稳转HBx肝细胞中分别转染SATB1启动子区域可能结合的核转录因子siRNA,real-time PCR、western blot和荧光素酶报告基因检测核转录因子SP-1、AP-1、NF-κB和SATB1的表达情况。过表达SATB1的肝细胞上清孵育肝星状细胞,采用real-time PCR、western blot、细胞免疫荧光、CCK8和Edu分别检测肝星状细胞活化水平和增殖能力的变化。采用蛋白芯片筛选过表达SATB1和对照的肝细胞上清中细胞因子的含量及表达差异,然后添加细胞因子中和抗体到肝细胞上清和LX-2共孵育体系中,再次检测肝星状细胞活化水平和增殖能力的变化。最后,利用CC14诱导的HBV转基因鼠肝纤维化模型联合尾静脉注射SATB1干扰腺病毒,通过real-time PCR、western blot、免疫组织化学等方法阐明SATB1参与HBV相关性肝纤维化形成的作用及机制。结果:我们首先在58例肝组织中通过免疫组化技术证实SATB1与HBV相关性肝纤维化临床病理密切相关,且SATB1阳性主要在肝细胞胞核表达。然后使用四氯化碳诱导的HBV转基因小鼠纤维化模型和HBx稳转肝细胞系,从体内和体外水平证实HBx上调SATB1表达,且ERK和JNK信号通路在其中发挥作用。分离原代肝细胞、肝星状细胞和使用细胞株L02、LX-2,通过共敷育肝细胞和肝星状细胞,我们发现SATB1诱导肝细胞表达促HSCs活化的细胞因子激活HSCs。在高表达SATB1肝细胞上清中,结合Elisa和蛋白芯片我们筛选出促纤维化因子IL-6,PDGF-AA,CTGF。抑制SATB1后,在稳转HBx肝细胞上清中,细胞因子IL-6,CTGF分泌减少。添加相应细胞因子中和抗体,我们证实IL-6,PDGF-AA,CTGF在SATB1促HSCs增殖和活化中发挥作用。在HBV转基因小鼠肝纤维化模型中,我们通过尾静脉注射shRNA腺病毒干扰SATB1表达,结果证明下调肝组织SATB1表达能抑制HBV相关性肝纤维化形成。结论:我们研究证实在HBV相关性肝纤维化中,HBx通过诱导肝细胞SATB1表达,进而上调促HSCs活化的细胞因子IL-6,PDGF-AA,CTGF分泌,促进HSCs活化和增殖,导致肝纤维化。