论文部分内容阅读
菊花(DendranthemaXgrandiflorum(Kamat)Kitam)起源于中国,是我国十大传统名花和世界四大鲜切花之一。菊花品种繁多,种下变异极为丰富,具有重要的经济价值。中国栽培菊花大约有3000个品种,具有悠久的栽培历史,株型、叶片、花色、花瓣(小花)形态等都有非常丰富的变化。如此众多的品种和变异式样给品种的分类、鉴定和品种权的保护带来极大困难。AFLP(扩增片断长度多态性)是一种新的DNA分子标记技术,具有丰富的多态性、较好的稳定性和较高的个体特异性,广泛应用于品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因定位等方面。本试验在建立较稳定的菊花AFLP技术体系基础上,构建了26份菊花材料的图谱,分析了其遗传多样性,以期为菊花品种鉴定、亲缘关系分析、高密度遗传图谱构建、核心种质构建等奠定基础。本文采用改良常规CTAB法提取菊花基因组DNA。其提取液成份为:100mmol/LTris-HCL(pH 8.0),20mmol/LEDTA,1.4 mol/LNaCl,2%CTAB,2%PVP40,50 mmol/Lβ-巯基乙醇,粗提后的DNA经RNase除去RNA;苯酚/氯仿抽提一次,氯仿/异戊醇抽提一次,去除蛋白质,DNA降解少,无蛋白质和RNA,获得了高质量的扩增模板。在此基础上,得到清晰的菊花AFLP图谱,从而建立了最佳的菊花AFLP反应体系。利用AFLP分子标记技术研究26个菊花品种的遗传多样性,从64对引物中筛选出的7对AFLP选择性引物对菊花种质资源进行了AFLP分析,都得到了清晰的图谱,表明这些引物用于菊花AFLP分析是可行的。7个引物组合共扩增出389条带,其中多态性条带294条,多态性占75.54%,平均每个引物组合扩出多态性条带42.0条,每一个引物组合都可将26个品种完全分开。说明菊花存在丰富的遗传变异,遗传多样性水平很高。另一方面使用NTSYS2.0软件,通过UPGMA法对所得的多态性标记进行聚类分析,获得聚类树状图,其相似系数为0.61~0.85之间,结果表明26份菊花种质之间遗传关系相对来说比较近。依相似性系数0.75为界,将供试材料分成了五大类群。所得的试验结果与菊花传统分类法大体上相一致,其结果表明:AFLP技术是一种重复性高、多态性丰富、安全可靠的DNA指纹技术,可作为菊花分类的依据和基础。因此,AFLP技术在菊花品种分类和遗传多样性分析上的应用是可行的。