K562细胞增殖与损伤过程中[Ca~(2+)]_I的荧光检测分析

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Ca2+是细胞内重要的信息载体之一,在细胞生命活动中扮演着极其重要的角色。外源信号可以引起细胞胞浆钙离子浓度([Ca2+]i)的时空变化,形成钙信号,激发一系列细胞内事件的发生,最终完成其特定的生理功能。所以,研究钙信号与细胞生命活动的关系,尤其是与肿瘤细胞增殖、损伤或凋亡的关系,以及物理因素(磁场、射线等)作用下肿瘤细胞[Ca2+]i的变化,对于研究肿瘤细胞生物学和磁场生物效应具有重要的研究价值和现实意义。 本论文对人肿瘤细胞系K562[Ca2+]i进行比率荧光检测,研究了该细胞系在增殖和损伤过程中[Ca2+]i变化以及稳恒磁场对其[Ca2+]i的影响。主要工作内容包括: 1.建立了采用比率荧光显微法检测细胞内钙离子浓度的实验系统,完善了实验设备,并对系统的可靠性进行了相关检测分析。对K562细胞[Ca2+]i进行了比率荧光检测,发现增殖细胞群体中胞浆[Ca2+]i存在着明显差异。 2.对K562细胞进行同步化处理并跟踪检测了K562细胞增殖过程中不同周期时相[Ca2+]i变化,结果显示S期细胞[Ca2+]i保持较低水平,在细胞分裂前后(M期)出现较大波动,表明[Ca2+]i升高可能引发细胞分裂过程的启动和完成。 3.建立了紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡的经典模型,并在不同时间对各浓度紫杉醇作用下HL-60细胞的[Ca2+]i进行了检测,结果显示细胞[Ca2+]i升高可能是细胞凋亡的上游信号。 4.采用9mT稳恒磁场对K562细胞进行处理并跟踪检测其[Ca2+]i的变化,结合细胞周期[Ca2+]i变化及流式细胞分析等实验结果,证实长时间的连续曝磁会抑制肿瘤细胞的生长,磁场处理下连续曝磁时细胞[Ca2+]i升高应该是其死亡信号。
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