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目的:观察盐酸二甲双胍对不同糖浓度环境下小鼠颅骨成骨细胞增殖、凋亡及功能蛋白表达的影响,并探讨过氧化物酶体增殖激活物受体(PPAR)γ在其分子机制中的作用。方法:体外培养原代小鼠颅骨成骨细胞,培养至第三代进行实验。(1)将其分为8组,分别为正常糖浓度对照组(5.5mmol/L GLU+0umol/LMET)、正常糖浓度25umol/L二甲双胍干预组(5.5mmol/LGLU+25umol/LMET)、正常糖浓度50umol/L二甲双胍干预组(5.5mmol/LGLU+50umol/LMET)、正常糖浓度100umol/L二甲双胍干预组( 5.5mmol/L GLU+100umol/LMET )、高糖对照组( 25mmol/LGLU+0umol/LMET )、高糖25umol/L二甲双胍干预组( 25mmol/LGLU+25umol/LMET )、高糖50umol/L二甲双胍对照组( 25mmol/LGLU+50umol/LMET )、高糖100umol/L二甲双胍干预组( 25mmol/LGLU+100umol/LMET),干预48‐72h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;AnnexinV‐FITC/PI双染法流式细胞术定量检测细胞的凋亡情况;干预时间延长至1w‐3w,比色法和放射免疫法(RIA)分别检测培养上清液中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平的变化;半定量RT‐PCR检测细胞中PPARγ和骨形成蛋白(BMP)2的mRNA表达情况;Westernblot法检测细胞PPARγ蛋白表达的变化。(2)细胞分为分别为空白对照组、1umol/LAMPK抑制剂compoundC干预组、100umol/L盐酸二甲双胍干预组,1umol/LcompoundC+100umol/L盐酸二甲双胍联合干预组,3w后细胞免疫荧光法检测二甲双胍及CompoundC作用下细胞中AMPK表达的变化。结果:1、在相同干预时间点,与正常糖浓度对照组相比,高糖对照组细胞增殖明显受抑制。随着盐酸二甲双胍浓度的增高,细胞的增殖活性增强。2、高糖对照组细胞的早期凋亡率高于正常糖浓度对照组。在正常糖浓度组,盐酸二甲双胍对细胞的凋亡无影响,而在高糖组,细胞凋亡率随着盐酸二甲双胍浓度的增高而减少。3、在相同干预时间点,高糖对照组细胞的ALP、OCN、BMP‐2的表达均较正常糖浓度对照组下降。在盐酸二甲双胍干预组,细胞ALP、OCN、BMP‐2随着二甲双胍浓度的增加而增加。4、在相同干预时间点,高糖对照组细胞PPARγ的mRAN和蛋白的表达量均较正常糖浓度对照组增高,随着盐酸二甲双胍浓度的增高,细胞PPARγ的mRNA和蛋白的表达量均减少。5、在盐酸二甲双胍干预组,AMPK表达较空白对照组增高,而PPARγ的表达则减少,在AMPK的抑制剂compoundC组AMPK和PPARγ的表达则相反。结论:1、高糖环境对成骨细胞产生损害作用,可抑制成骨细胞的增殖、诱发细胞凋亡,并导致功能蛋白ALP、OCN、BMP‐2的表达减少,这一损害作用与高糖环境能够诱导细胞中PPARγ的mRNA和蛋白的表达有关。2、无论在正常糖浓度环境下或是高糖环境下,盐酸二甲双胍均能促进成骨细胞的增殖活性,并增加其功能蛋白ALP、OCN、BMP‐2的表达,高糖环境下尚能减少其早期凋亡。这些作用与二甲双胍抑制PPARγ的mRNA和蛋白的表达有关。3、盐酸二甲双胍作为AMPK的激动剂,其下调PPARγ表达的作用可能与AMPK有关,AMPK的激活可部分抑制PPARγ的表达。