所有正常发育的B细胞和T细胞均要分别进行免疫球蛋白重链(IgH)基因重排和T细胞受体(TCR)基因重排。由于每个淋巴细胞均有自己独特的基因重排，细胞之间重排的差异导致淋巴组织良性增生性疾病表现为多克隆重排。众所周知在恶性肿瘤中，肿瘤细胞起源于同一克隆。在非霍奇金淋巴瘤中表现为IgH基因和/或TCR基因单克隆重排。这是用基因重排检测鉴别淋巴组织良性增生性疾病与恶性淋巴瘤的理论依据及分子病理学基础。近年来运用聚合酶链反应(PCR)技术检测淋巴瘤基因克隆性重排已在国外广泛开展，国内亦有报道。PCR检测IgH基因重排常针对V区序列相对保守的FRⅠ、FRⅡ、FRⅢ及J区序列设计一致的V区及J区引物。其中最常用及检测率最高的是针对FRⅢ引物FR3A。使用FR3A引物，PCR在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)IgH基因克隆性重排检测率可达60％左右，但FR3APCR常因CDR发生体细胞突变而扩增失败，联合应用其余FR引物可提高PCR-IgH基因克隆性重排检测率。PCR检测TCR基因克隆性重排常针对TCRγ及TCRβ基因靶点来检测。TCRγ基因结构相对简单，并且其重排发生在T细胞发育的早期，几乎在所有的T淋巴细胞肿瘤中均可检测到，因此临床最常靶对TCRγ基因来检测TCR基因的重排。在T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中，PCR的TCRγ基因克隆性重排检测率60％左右，TCRβ约为40％，联合检测TCRβ，TCRγ可将TCR基因克隆性重排检测率提高至70％-80％。淋巴瘤基因克隆性重排有时并非型特异性，约5％-10％成熟T-NHL及B-NHL表现为双重重排(表型为B或T的淋巴瘤同时发生IgH基因及TCR基因克隆性重排)。双重重排与它们向恶性转化的关系仍有待阐明，发生双重重排的淋巴瘤病例是否在生物学行为(如增殖)有别于仅发生单克隆重排的淋巴瘤病例， 浙江大学硕土学位论文这些问题国外报道较少，国内也未见报道。目前常采用琼脂糖及聚丙烯酷胺凝胶电泳来检测分析PCR产物，在判断结果时可能多少带点主观，因此我们尝试采用凝胶扫描技术，使在结果判断时可采用相对客观的标准。 我们采用 PCR方法，联合！gH FR3A及 FRZA、TCRY、TCR6引物，检测 125例非霍奇金淋巴瘤（NHL）IgH基因及TCR基冈克隆性重排，以了解在NHL中，各种不同病理类型的肿瘤川不同的引物行PCR方法的克隆性重排的检测率，从而寻求最有效的检测方法，并了解IgH基因及TCR基因克隆性重排检测在非霍奇金淋巴瘤病理诊断中的作用及地位。用免疫组织化学方法检测了其中 117例 NHL的 Ki67蛋白表达，探讨发生双重重排的淋巴瘤与正常的单克隆重排的淋巴瘤在细胞增殖方面有无差异。并对13例良性淋巴组织（5例反应性增生淋巴结，3例慢性扁桃体炎，5例正常人外周血单核细胞）及 65例经FR3APCR及聚丙烯酚胺凝胶电泳检测证实为IgH基因克隆性重排B－NHL病例，采用凝胶扫描技术进行分析，以寻求及验证非霍奇金淋巴瘤单克隆重排判断的相对客观的标准。最后对B－NHL行PCRIgH基因FR3A，T－NHL行TCRY基因克隆性重排检测的敏感性研究。 材料与方法 1 材料：收集 1997－2002年我医学院附属医院及省内其它医院 125例 NHL标本，其中日－NHL96例，T－NHL29例，全部标本经中性福尔马林固定、常规石蜡包埋、4～SPm连续切片，除常规HE染色外，采m免疫组化SP法标记淋巴细胞亚群，根据肿瘤的免疫表型，划分为B－NHL或T－NHL。按照WHO关丁淋巴及造血系统肿瘤分类对所有病例进行分类。 2方法：采用 PCR方法，用 lgH FR3A及 FRZA、TCRY、TCR6引物对 125例 NHL行 IgH基因及 TCR基因克隆性重排检测。并对其中的 117例 NHL采用免疫组化两步法检测 Ki－67蛋白表达。操作按试剂盒说明书进行。将M细胞 DNA及一已知 TCRY克隆性重排T－NHL的DNA与多克隆的正常人淋巴结DNA按不同比例混合以研究IgHFR3APCR及 TCRYPCR基因克隆性重排检测的敏感性。上述试验均设阳性对照及多克隆阴性对照及空白对照。对 13例良性淋巴组织及 65例 IgH基因克隆性重排 BNHL，IgHFR3APCR的扩增产物行聚丙烯酷胺凝胶电泳，并采用凝胶扫描技术进行分析。在扫描曲 3 浙江大学硕土学位论文 线结果分析上，我们设定y轴为相应光密度值，X轴为产物长度。计算hi／hZ比值（hi代 表正常分布曲线以上的最大的峰高，hZ代表上常分布峰的峰高）。免疫组化结果计算增殖 指数：选择有代表性区域，在高倍视野下（40X 10）计数数个高倍视野的全部肿瘤细胞共 达 1000个，同时计数阳性细胞数，计算出增殖指数［（阳性细胞／1000）X 100％］。实验结 果用SPSS统计软件进行统计学处理，组间比较采用one－way检验。 结 果卜 采用FR3A引物，克隆性匕H基因重排在96例B－NHL中检测率为68O（65／96），采用 FRZA引物，检测率为 61o（59／96），联合FR3A，FRZA引物，总检测率为 83％（80／96）。2．TCRY克隆性重排在29例T－NHL中检测率?