论文部分内容阅读
【背景与目的】胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，在我国无论发病率还是死亡率都很高，严重威胁人类健康。化疗是治疗胃癌的一个重要手段，而目前对胃癌的化学治疗疗效并不理想，其中肿瘤细胞的抗药性是妨碍其治疗效果的主要原因之一。因此，如何提高化疗药物的疗效是目前肿瘤治疗的一个研究热点。脆性组氨酸三联体（fragile histidinetriad，FHIT）基因是近年发现的抑癌基因之一，也是第一个将脆性位点和肿瘤联系起来的抑癌基因，很多研究表明FHIT基因异常可能与人类胃癌的发生发展有关。绝大多数化疗药物是通过不同的途径诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用的，凋亡调节可影响某些抑癌基因的表达并且影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，而细胞凋亡机制缺陷是肿瘤细胞产生耐药的关键因素之一。基因治疗为当今肿瘤治疗的热点之一，化疗和基因治疗联合应用成为恶性肿瘤新的综合治疗途径之一。已有研究发现，外源性FHIT基因可促进某些肿瘤细胞发生凋亡，也能改变某些肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，但对于FHIT基因表达是否能够改变化疗药物对胃癌的疗效研究很少。本研究通过脂质体转染技术将FHIT基因转染到有FHIT基因表达缺失的MGC-803胃癌细胞株，观察FHIT基因表达对胃癌细胞增殖和化疗敏感性的影响。【方法】碱裂解法提取质粒并对所提质粒测序鉴定。通过脂质体介导的方法把质粒pRC／CMV-FHIT及pRC／CMV转染到有FHIT基因表达缺失的胃癌细胞株MGC-803，经G418筛选获得稳定克隆，并对转染后的胃癌细胞用Western blot鉴定，通过集落形成实验、细胞生长曲线和凋亡率观察FHIT基因对胃癌细胞增殖的影响，通过MTT法检测不同药物浓度下的肿瘤细胞存活率并求得IC50以探讨FHIT基因对胃癌细胞化疗敏感性的影响。【结果】（1）提取的质粒测序结果显示与Gene bank中序列一致，质粒浓度和纯度均符合试验要求。（2）转染FHIT基因的胃癌细胞有外源性FHIT基因的表达。（3）转染FHIT基因的胃癌细胞生长能力下降，MGC-803-FHIT组、MGC-803组和MGC-803-vector组的克隆形成率分别为（19.67±3.16）％、（35.00±3.16）％和（29.50±4.76）％，细胞凋亡率分别为（19.59±2.90）％、（3.38±1.29）％和（4.41±0.94）％，MGC-803-FHIT组的克隆形成率和凋亡率与MGC-803组和MGC-803-vector组差异均有统计学意义。（4）转染FHIT基因的胃癌细胞对顺铂（DDP）引起的细胞存活率下降、对5-氟尿嘧啶（5-FU）引起的细胞存活率提高。顺铂（DDP）引起的MGC-803-FHIT组、MGC-803组和MGC-803-vector组的IC50分别为（2.09±0.50）mg／L、（4.17±0.07）mg／L和（4.06±0.19）mg／L，5-氟尿嘧啶（5-FU）引起的各组IC50分别为（1.78±0.39）mg／L、（0.60±0.08）mg／L和（0.57±0.05）mg／L。以上两种药物作用下MGC-803-FHIT细胞存活率和IC50与MGC-803组和MGC-803-vector组差异均有统计学意义。【结论】外源性FHIT基因可以抑制胃癌细胞增殖、促进其凋亡。FHIT基因转染对不同药物作用下胃癌细胞化疗敏感性的影响不一致，FHIT基因转染可以提高胃癌细胞MGC-803对顺铂（DDP）的敏感性、降低对5-氟尿嘧啶（5-FU）的敏感性。以上研究提示，将FHIT基因与抗癌药物联合应用可能会提高或降低化疗药物的作用效果，从而指导临床用药。