【摘 要】
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目的:通过研究不同细胞中人白血病相关蛋白16(LRP16)表达水平,探讨LRP16通过调控Wnt/β-catenin通路对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:选取CCD841 Co N细胞组、Lo Vo细胞组、HT29细胞组、COLO205细胞组、SW620细胞组、HCT116细胞组六组细胞作为研究对象,通过实时荧光定量法(RT-q PCR)测定不同细胞中LRP16表达水平,筛选出细胞中LRP16表
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目的:通过研究不同细胞中人白血病相关蛋白16(LRP16)表达水平,探讨LRP16通过调控Wnt/β-catenin通路对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:选取CCD841 Co N细胞组、Lo Vo细胞组、HT29细胞组、COLO205细胞组、SW620细胞组、HCT116细胞组六组细胞作为研究对象,通过实时荧光定量法(RT-q PCR)测定不同细胞中LRP16表达水平,筛选出细胞中LRP16表达量最高的HCT116细胞作为研究对象。首先通过si-LRP16转染HCT116细胞,转染后的HCT116细胞设置为实验组:si-LRP16组;另外设置si-LRP16阴性对照序列为:si-LRP16阴性对照组;以及设置等体积培养液为空白对照组。分别用MTT法测定转染后si-LRP16组、si-LRP16阴性对照组、空白对照组各组HCT116细胞活性、Transwell小室侵袭实验测定转染后si-LRP16组细胞、si-LRP16阴性对照组细胞、空白对照组细胞侵袭能力、划痕实验测定转染后si-LRP16组细胞、si-LRP16阴性对照组细胞、空白对照组细胞的增殖、侵袭、迁移能力;再用蛋白印迹法(WB)测定转染后si-LRP16组细胞、si-LRP16阴性对照组细胞、空白对照组细胞GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、Ki-67、PCNA、E-cadherin、N-cadherin表达水平来分析LRP16调控Wnt/β-catenin通路对HCT116细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。结果:通过实时荧光定量法(RT-q PCR)测定CCD841 Co N细胞组、Lo Vo细胞组、HT29细胞组、COLO205细胞组、SW620细胞组、HCT116细胞组六组细胞LRP16表达水平。对CCD841 Co N细胞组、Lo Vo细胞组和HT29细胞组三组LRP16表达水平结果进行统计学分析并两两相比发现三组细胞组LRP16表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。CCD841 Co N细胞组、Lo Vo细胞组和HT29细胞组三组LRP16表达水平表达水平较低,COLO205细胞组、SW620细胞组、HCT116细胞组LRP16表达水平显著升高(P<0.05),其中对COLO205细胞组和SW620细胞组LRP16表达水平进行统计学分析发现其差异无统计学意义(P>0.05),通过对COLO205细胞组、SW620细胞组、HCT116细胞组LRP16表达水平较高的的三个细胞组进行LRP16表达水平对比发现HCT116细胞组LRP16表达水平显著高于COLO205细胞组和SW620细胞组(P<0.05)。因此后续实验以HCT116细胞进行,与空白对照组、si-LRP16阴性对照组相比,si-LRP16组LRP16表达水平显著降低(P<0.05);与空白对照组、si-LRP16阴性对照组相比,si-LRP16组HCT116细胞体外侵袭细胞数显著降低(P<0.05),与空白对照组、si-LRP16阴性对照组相比,si-LRP16组HCT116细胞体外迁移能力显著降低(P<0.05),与空白对照组、si-LRP16阴性对照组相比,si-LRP16组HCT116细胞GSK3β表达水平无明显变化(P>0.05),GSK3β磷酸化水平、β-catenin表达水平显著降低(P<0.05),与空白对照组、si-LRP16阴性对照组相比,si-LRP16组HCT116细胞Ki-67、PCNA、N-cadherin表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin表达水平显著升高(P<0.05),HCT116细胞增殖、侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05)。结论:LRP16可能通过抑制Wnt/β-catenin通路活性,从而降低HCT116细胞增殖、侵袭、迁移能力。
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