【摘 要】
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目的:研究大鼠SMG细胞SSB1基因沉默后,放射损伤下细胞的增殖及修复情况,探讨SSB1与放射性DSBs修复的关系。方法:应用机械胰酶联合法进行大鼠SMG细胞原代培养及免疫组织化学法
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目的:研究大鼠SMG细胞SSB1基因沉默后,放射损伤下细胞的增殖及修复情况,探讨SSB1与放射性DSBs修复的关系。方法:应用机械胰酶联合法进行大鼠SMG细胞原代培养及免疫组织化学法鉴定。实验分为3组:空白对照组(BC组)、阴性对照组(Ad-HK组)和实验组(Ad-SSB1-shRNA组)。重组腺病毒介导shRNA转染SMG细胞,荧光定量PCR及Western blot法检测SSB1表达沉默情况。CCK-8法检测未放射及放射后各组细胞活性。免疫荧光法检测实验组和阴性对照组放射后γ-H2AX焦点数动态变化。结果:细胞免疫组织化学法检测角蛋白和α-淀粉酶表达均呈阳性。转染72 h后转染效率接近90%,实验组SSB1表达较对照组明显降低(P<0.05)。照射前,实验组细胞活性下降不明显,120 h时细胞活性才明显低于空白对照组(t=3.29,P<0.05)。照射后,实验组各时间点细胞活性均明显低于阴性对照组和空白对照组(F=10.19~30.13,P<0.05)。γ-H2AX免疫荧光显示,5?Gy照射1h后,两组γH2AX焦点数均达到最大值,差异无统计学意义(t?=1.14,P>0.05)。而后阴性对照组γH2AX焦点数急剧减少,但实验组γH2AX焦点数消退明显减缓。结论:SSB1基因沉默的大鼠SMG细胞对放射损伤更敏感。SSB1在大鼠SMG细胞放射性DSBs修复中有着重要作用。
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