【摘 要】
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核盘菌寄主范围和地理分布都十分广泛,是世界农业上危害最严重的病原真菌之一,造成了严重的经济损失。核盘菌菌株DT-8含有核盘菌弱毒相关DNA病毒1（SsHADV-1）,具有弱毒特性。前期研究发现用DT-8菌丝液处理油菜种子,种子可以正常萌发并发育成健康植株,且在油菜组织可检测到DT-8及SsHADV-1,说明死体营养型病原真菌核盘菌感染病毒SsHADV-1在一定条件下可转变为对寄主无显著不良影响的内
【基金项目】
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现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-13）； 国家自然科学基金重点项目（31430070）；
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核盘菌寄主范围和地理分布都十分广泛,是世界农业上危害最严重的病原真菌之一,造成了严重的经济损失。核盘菌菌株DT-8含有核盘菌弱毒相关DNA病毒1（SsHADV-1）,具有弱毒特性。前期研究发现用DT-8菌丝液处理油菜种子,种子可以正常萌发并发育成健康植株,且在油菜组织可检测到DT-8及SsHADV-1,说明死体营养型病原真菌核盘菌感染病毒SsHADV-1在一定条件下可转变为对寄主无显著不良影响的内生真菌,此外,DT-8内生生长可提高油菜对强毒力核盘菌的抗性,因此弱毒菌株DT-8具有极高的生防潜力和研究价值。本研究首先在单基因片段水平、基因组水平和DT-8内生油菜cDNA水平验证了基因消除PCR（Removing PRC,R-PCR）的可行性,优化建立了成熟的试验条件和技术体系。并利用R-PCR和高通量测序技术初步分析了DT-8菌株内生性生长时油菜植株及DT-8中上调表达基因富集的主要通路,为后续研究奠定了基础,主要研究成果如下:1.在单基因片段、基因组以及cDNA水平上,探索了R-PCR引物和模板的制备体系及基因消除阶段引物和模板的比例。结果表明在单基因水平上,R-PCR引物与模板浓度比在4:1～8:1时消除效果最好;在基因组水平上,由于消除产物片段过小,比对到的全部为接头序列;在cDNA水平上,可同时克隆到油菜和DT-8表达的基因,说明R-PCR可用于该体系差异表达基因的分析。2.对R-PCR技术进行了优化,发现以油菜上胚轴为取样部位,并提高第一阶段循环数到16后,可最大限度提高核盘菌基因在消除产物中的所占比例。3.对R-PCR消除产物进行了高通量测序,对筛选基因进行GO功能和通路富集分析。基因表达数据表明DT-8内生生长后油菜植株中的抗病抗逆及光合作用相关通路被激活;而DT-8中物质与能量代谢及细胞增殖调控通路有所富集,可能与其内寄生状态的维持有关。本研究成功将R-PCR应用于核盘菌弱毒菌株DT-8内寄生寄主油菜后的基因差异表达分析中,并与高通量测序方法相结合筛选到了大量参与油菜与核盘菌互作的候选基因。为进一步研究死体营养型病原真菌向内生真菌的转变以及内生真菌与寄主植物的互作提供了新的研究方法和思路。
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