酮洛芬(ketoprofen)又名酮基布洛芬,化学名为3-苯甲酰基-α-甲基苯乙酸,在水中几乎不溶,极易溶于甲醇,易溶于乙醇、丙酮或乙醚。酮洛芬是一种非选择性的非甾体类抗炎药(NSAIDs),具有镇痛、抗炎和解热的作用,临床用于术后疼痛,急性肾绞痛,各种轻度、中度癌痛(WHO推荐重度癌痛时可作为阿片类镇痛剂的辅助用药),痛风发作引起的疼痛,风湿性及类风湿性关节炎,强直性脊椎炎,骨关节炎等。另外,酮洛芬还有一定的中枢性镇痛作用。按照世界卫生组织(WHO)推荐的三阶梯止痛法,对于轻度、中度癌痛,宜首选酮洛芬等NSAIDs。目前,国内市场上销售的酮洛芬制剂主要有普通片、分散片、胶囊剂和混悬剂等,尚无注射剂上市。酮洛芬口服后对胃肠道刺激性较大,易产生恶心、腹痛、胃肠道出血等严重的胃肠道副作用,因而在临床上的应用范围受到一定限制。为此,罗永煌教授带领的科研团队与宜昌三峡制药有限公司联合研究开发了酮洛芬注射液,肌内注射给药,可以避免酮洛芬与胃肠道直接接触,在一定程度上可以减轻胃肠道的副作用；而且,酮洛芬注射液肌内注射后,作用迅速、生物利用度高、无首过效应,给急症、重症疼痛患者以及不能口服给药的患者带来了新的选择,具有非常好的实用价值及临床应用前景。本课题组研制的酮洛芬注射液,按照国家食品药品监督管理局第28号令《药品注册管理办法》中“化学药品注册分类”方法,酮洛芬注射液属于3类新药。本文对其进行了临床前的部分研究,旨在为酮洛芬注射液的临床试验和新药注册积累资料。其研究内容主要包括以下几部分：分析方法的建立：本文建立了酮洛芬注射液的含量和有关物质的测定方法。其中,酮洛芬含量测定的色谱条件为：用十八烷基硅烷化硅胶(Shim-pack VP-ODS 250×4.6mm 5μm)为色谱柱填充剂；以磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾6.8 g溶解于100 ml水中,用磷酸调节至pH 3.5士0.1)-乙腈-水(2：43：55)为流动相,检测波长为255nm,流速为1.2 ml/min,柱温为25℃,进样量为10μL。理论塔板数按酮洛芬峰计算不低于2000。酮洛芬有关物质测定的色谱条件为：检测波长233 nm,进样量20μL,其它条件与酮洛芬含量测定项下相同。经方法学验证,所建立的分析方法专属性强,重现性好,准确度高,适用于酮洛芬注射液的质量控制。处方工艺研究：采用单因素试验和正交试验,以注射液的澄明度、稳定性和含量等为考察指标,最终确定了酮洛芬注射液的最优处方为：5.0%酮洛芬,3.6%精氨酸,2.5%苯甲醇,枸橼酸适量调节pH值至6.0～8.0。同时,对配液过程中活性炭用量及吸附时间和吸附温度、配液温度、灭菌条件等制备工艺进行了筛选与优化,确定出最佳制备工艺为：取规定量60%的注射用水,加入处方量助溶剂,搅拌至溶解后,加入处方量酮洛芬,加热(50℃-60℃)并充分搅拌,使酮洛芬完全溶解；加入处方量苯甲醇和0.1%活性炭,加热至60℃左右并不断搅拌,保温10 min,过滤脱炭；待药液冷却至室温,测pH值,加入枸橼酸适量,调节pH值到6.5±0.5,加注射用水至全量,搅拌,混匀,精滤,检测滤液(中间体)质量。当滤液检测合格后,在充氮气条件下灌封于2 ml棕色的安瓿瓶中,121℃灭菌12min,检漏、灯检、贴签、包装。用该处方和工艺所制备的酮洛芬注射液澄明、稳定,pH适宜,含量准确。酮洛芬注射液的规格为2ml:100mg。质量标准研究：参照《中国药典》和《美国药典》现行版所载“酮洛芬肠溶胶囊”的含量限度规定,结合本品三批样品实际测定的数据,将本品的含量限度拟定为“酮洛芬(C16H1403)应为标示量的90.0%～110.0%”；其含量测定方法,主要依据《中国药典》现行版所载“酮洛芬肠溶胶囊”和“酮洛芬搽剂”标准中含量测定的方法,即HPLC法拟定。经对酮洛芬含量测定方法的方法学验证,证明方法可行；而有关物质主要参照《英国药典》现行版所载“酮洛芬胶囊”的标准,即采用HPLC法,对已知杂质A和杂质C采用外标法,对未知杂质采用主成分自身对照法。经方法学验证,证明方法可行。另外,本文对酮洛芬注射液的鉴别与检查进行了质量研究。结果,鉴别项目均为阳性；检查项目均符合《中国药典》注射液项下相关要求；按照建立的酮洛芬含量和有关物质测定方法对三批酮洛芬注射液进行了测定,结果均符合限度要求,进一步证明其方法灵敏度高,重复性好,可操作性强。稳定性研究：本文对酮洛芬注射液进行了影响因素试验、加速试验和长期试验。影响因素试验进行了高温试验[(60±2)℃]、强光照试验[(4500±500)lx]和冻融试验(-10--20℃冰箱冷冻室,40℃电热干燥箱,循环三次),结果：酮洛芬注射液在强光照射下会发生降解,主要指标发生明显变化,即含量下降,有关物质增加,故储存及运输过程中应避光；高温60℃和冻融条件下的外观性状、颜色、pH值、含量和有关物质等主要指标均无明显变化,说明酮洛芬注射液在这些条件下较稳定。酮洛芬注射液按上市包装在加速试验和长期试验条件下均较稳定,且长期试验仍在继续考察之中。急性毒性试验、镇痛作用及对中枢神经系统影响：急性毒性试验采用一次给药观察14d的试验方法。镇痛试验采用的是小鼠热板法和小鼠醋酸扭体法,均表现出明显的镇痛作用和量效关系。对中枢神经系统的影响试验表明,酮洛芬能使小鼠自主活动减少,对小鼠协调运动具有较弱的抑制作用,与巴比妥类药物联用具有微弱的协同作用,能延长雄性小鼠睡眠持续时间。刺激性试验结果,经肉眼观察酮洛芬注射液对血管及肌肉均没有明显刺激性。体外溶血试验,未见溶血和红细胞凝集现象。以上试验表明,酮洛芬注射液的镇痛效果确切,安全性高,对中枢神经系统有较弱的抑制作用。非临床药代动力学研究：本文建立了大鼠血浆酮洛芬浓度测定的RP-HPLC方法,比较了酮洛芬注射液肌注、静注大鼠后的药代动力学特征。RP-HPLC法测定血药浓度,DAS 2.0药动学软件处理血药浓度数据。试验结果：酮洛芬与杂质完全分离且无其它干扰,血浆酮洛芬浓度在0.02～40μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9998),定量下限(LLOQ)为0.02μg·ml-1。高、中、低浓度酮洛芬的提取回收率均值分别为81.47%、82.32%和79.88%；日内精密度分别为2.98%、3.19%和3.43%；日间精密度分别为6.03%、4.82%和5.27%。大鼠单次肌内和尾静脉注射给药的主要药代动力学参数：T1/2z分别为5.19±0.08 h和2.95±0.14 h,Tmax分别为0.33±0.01h和0.02±0.01 h,Cmax分别为18.32±0.02 mg/L和19.02±0.01 mg/L, AUC0-24分别为36.46±0.17 mg/L·h和37.30±0.23 mg/L·h。药代参数表明,酮洛芬注射液肌内注射吸收迅速且完全,给药后约20分钟血药浓度达高峰,绝对生物利用度高达97.7%,可为临床肌内注射给药提供基础数据。本研究建立的RP-HPLC检测血浆酮洛芬浓度的方法,简便、准确、重复性好、特异性强,可用于血浆酮洛芬浓度测定及其药代动力学研究。