拟南芥抗草酸突变体的筛选和分析

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拟南芥具有基因组小、结构简单、形体小、生长周期短、繁殖系数高、自花授粉等优点,且其基因组全序列测定工作已于2000年12月完成。为此,我们以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)为材料,建立并优化拟南芥草酸突变体筛选体系,取得了如下主要结果:1、用草酸平板筛选法筛选拟南芥草酸抗性增强突变体,并确定了筛选压为1.2mmol/L。2、经过两轮在含有1.2mmol/L草酸的培养基上筛选得到草酸抗性增强突变体5株,通过TAIL-PCR扩增得到T-DNA插入侧翼序列,其中4株突变体D630、D282、D154、D74的T-DNA为同一插入位点,均插在At5g10450基因内部。另外1株突变体D33插在At2g39720、At2g39730两个基因的间区。3、我们从拟南芥种质资源库(ARBC)鉴定了At5g10450基因的SALK T-DNA插入缺失突变体,salk068774。发现该基因的缺失突变体并没有草酸抗性。4、构建了At5g10440、At5g10460基因的过表达载体,进行了拟南芥浸花转化并在含有basta的土壤中筛选得到一批转化苗。5、构建了草酸氧化酶的表达载体,用农杆菌介导转入拟南芥野生植株中并在含有basra的土壤中筛选得到一批转化苗。6、用菌核病菌接种突变体和野生型植株,发现突变体在一定程度上对菌核病菌的抗性有所增强。研究结果表明,植物对草酸的抗性与菌核病等病原菌的抗性具有较好的相关性。
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