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目的：1.探讨在乙肝疫苗中单独或联合应用TLR3与TLR9激动剂对小鼠体液免疫水平、mDC活化和细胞因子分泌的影响。2.探讨TLR3与TLR9激动剂单独或联和应用作为乙肝疫苗佐剂的可行性。方法：将50只周龄为6~7周的BALB/c雌性小鼠随机分为5组，分别为：①空白对照组；②HepB组；③HepB+Poly(I:C)组；④HepB+CpG ODN组；⑤HepB+Poly(I:C)+CpG ODN组；各组小鼠分别于实验开始后第0、4周左胫前肌注射疫苗和相应激动剂，第6周采集非抗凝血和抗凝血，处死小鼠并摘取脾脏。采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay, ELISA)检测小鼠血清中抗-HBs浓度，采用流式细胞术(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)检测全血中B细胞和mDC的比例，采用ELISA法检测脾脏组织匀浆上清液中IL-2、6、10、12的浓度。结果：1.各组小鼠完成全程免疫后使用ELISA检测小鼠血清抗-HBs浓度，结果显示：与空白对照组相比，其他各组小鼠血清抗-HBs浓度均显著增高(P<0.05)。与HepB组相比，TLR3与TLR9激动剂单独或联合使用组小鼠血清抗-HBs浓度均有不同程度升高，其中单独使用TLR9激动剂的小鼠血清抗-HBs浓度最高，但差异均无统计学意义(P>0.05)。进一步检测小鼠全血中B细胞含量，结果显示：使用TLR9激动剂的小鼠全血中B细胞含量显著高于空白对照组和HepB组，且差异有统计学意义(P<0.05)。联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠其B细胞含量低于其他各组，且差异有统计学意义(P<0.05)。其他组间小鼠全血B细胞含量差异无统计学意义(P>0.05)。2.检测小鼠全血中mDC含量，结果显示：与空白对照组相比，HepB组小鼠全血mDC含量显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。单独使用TLR3或TLR9激动剂的小鼠全血mDC含量高于空白组，低于HepB组，但差异均无统计学意义(P>0.05)。TLR3与TLR9激动剂联合使用组小鼠全血mDC含量低于HepB组，差异存在统计学意义(P<0.05)。3. ELISA法检测小鼠脾脏组织液中细胞因子浓度，Th1型细胞因子检测结果显示各组间小鼠脾脏组织液IL-2浓度总体上存在统计学差异(F=5.717,P<0.05)。其中，HepB组小鼠脾脏组织液IL-2浓度低于空白对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。单独使用TLR3或TLR9激动剂组小鼠脾脏组织液IL-2浓度高于空白对照组和HepB组，但差异无统计学意义(P>0.05)。联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠脾脏组织液IL-2浓度显著高于空白对照组和HepB组，差异存在统计学意义(P<0.05)。IL-12浓度测量结果显示，单独或联合使用TLR9激动剂组小鼠脾脏组织液中IL-12浓度均低于空白对照组和HepB组，但差异均无统计学意义(P>0.05)。Th2型细胞因子浓度检测结果显示，各组间小鼠脾脏组织液IL-6浓度总体上存在统计学差异(F=5.355, P<0.05)。其中，联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠IL-6浓度显著低于空白对照组和HepB组(P<0.05)。其他各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-10浓度测量结果显示，单独或联合使用TLR3与TLR9激动剂的小鼠脾脏组织液IL-10浓度低于空白对照组和HepB组，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.接种乙肝疫苗后小鼠血清抗-HBs浓度显著升高。单独或联合使用TLR3与TLR9激动剂可不同程度提高抗-HBs分泌水平，其中TLR9激动剂的效果最强。此外，使用TLR9激动剂能够显著提高全血中B细胞含量，提示其可能通过抑制B细胞凋亡来提高体液免疫应答水平，刺激机体持续分泌抗体。由此推测TLR9激动剂可能是乙肝疫苗良好的潜在佐剂。2.接种乙肝疫苗可显著提升小鼠全血细胞中mDC比例，促进小鼠对HBsAg的识别与提呈。TLR3与TLR9激动剂单独应用后小鼠mDC比例未见显著改变，TLR3与TLR9激动剂联合应用后mDC比例显著下降，其机制有待进一步研究。3.联合使用TLR3与TLR9激动剂可显著增强小鼠脾脏组织分泌IL-2的能力，同时抑制其IL-6的分泌，提示TLR3与TLR9激动剂联合应用可在一定程度上改善乙肝疫苗中铝佐剂诱导的Th2型免疫应答偏倚。