新型的过氧亚硝基阴离子荧光探针的构建和生物成像

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近年来,荧光探针具有分析速度快、时空分辨率高、生物相容性好、无损原位成像等独一无二的优势,在化学医疗、环境科学,疾病诊断及生物成像等领域中发挥着巨大的作用,特别是在样品的原位检测和实时荧光成像等方面尤为重要。本论文中,我们构建了三种新型的荧光探针,实现了对过氧亚硝基阴离子(ONOO-)的检测,并且成功地应用于实际生物样品的成像。
  1.我们首先设计合成了一种新型的比率型荧光探针(Cy-NH2),用于检测ONOO-。首先,该探针结构简单,可通过简单的步骤获得;其次,由于ONOO-的强氧化能力导致π-共轭体系的破坏,使得探针具有大的发射波长位移(248nm);此外,探针对ONOO-具有高灵敏度,且荧光强度比高达1728倍;更重要的是,我们还将探针成功应用于活细胞中外源和内源ONOO-的荧光检测,并取得了令人满意的结果。
  2.基于我们上一章探针极好的性能,我们改进合成方法又合成了一系列不同取代基的比率型荧光探针,从中筛选出荧光性能最优的探针(Cy-NEt2)。首先,我们的探针可以通过廉价可靠的原料从头合成而获得;而且,探针显示出较大的发射波长位移(255nm),这有利于增强信号背景比。此外,Cy-NEt2可以特异性地靶向线粒体,因此可用于评估细胞和小鼠中的线粒体氧化应激状态。
  3.我们设计合成了一个新型的近红外的荧光探针(DCP-B),用于检测ONOO-。与前两章的探针相比,该探针具有更大的斯托克斯位移(173nm)、更长的近红外波长(763nm)和更低的检测限(3.3nM)。该探针中,我们选择了性能优异的二氰基异佛尔酮衍生物(DCP-OH)作为荧光团,硼酸酯基团作为识别团。探针DCP-B本身无荧光,这是因为分子内电荷转移(ICT)过程被中断。当加入ONOO-后,硼酸酯与ONOO-反应,ICT过程恢复,从而发出强烈的近红外的荧光。由于该探针具有优异的性能,我们成功地将其应用于活细胞中的外源性和内源性检测ONOO-,并取得了优异的结果。
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