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目的:近年来,不孕不育已成为人类生殖健康领域最为常见的疾病之一。据世界卫生组织(WHO)统计,不孕不育已经影响了世界范围内10-15%的适龄夫妇,其中由于男性因素导致的不育将近40%,随着辅助生殖技术的广泛应用,少精、弱精患者的生育问题基本得以解决,但对于非梗阻无精症患者尚无有效的治疗方案。因此由脂肪间充质干细胞转分化成精原干细胞成为目前研究重点,本实验旨在以高通量转录组测序分析脂肪间充质干细胞与精原干细胞的差异表达基因,以此作为由脂肪间充质干细胞转分化成精原干细胞的理论基础。 方法:本研究选用3周龄C57GFP雄性小鼠,取附睾周围脂肪组织及睾丸组织分别制备ADSCs及SSCs,利用免疫磁珠磁力分选技术来实现对ADSCs及SSCs的分选、纯化,将培养出的ADSCs及SSCs进行转录组高通量测序。转录组高通量测序基于PE150Illumina HiSeq2500,鉴定ADSCs与SSCs差异表达的mRNA、已知lncRNA和Novel lncRNA。对mRNA和lncRNA进行GO功能注释及GO富集分析,确定其在ADSCs和SSCs中参与生命活动的主要生物学过程。 结果:1、通过转录组测序共得出12873个差异表达mRNA,其中上调基因4399个,下调基因8474个。gzme、crisp1、megf10、esm1、upk1b、ivl、vmn2r79、prl2c2、foxc2、ccl20是ADSCs中差异表达上调最显著的十个基因,tpsb2、spock3、dpt、mcpt2、ifi202b、tpsab1、mcpt4、chodl、cpa3、ces1d是ADSCs中差异表达下调最显著的十个基因,GO富集分析显示其主要在细胞因子、细胞表面受体信号通路、免疫反应等方面发挥作用。 2、通过转录组测序共得出672个差异表达的已知lncRNA,其中表达上调248个,表达下调424个。GO功能注释表明已知lncRNA在细胞过程、代谢过程、生物调节、细胞组织成分等生物学过程中发挥作用,但已知lncRNA的GO富集分析未富集生物学过程。此外,还得到差异表达的Novel lncRNA共338个,其中表达上调169个,表达下调169个。 结论:本实验对ADSCs及SSCs进行了mRNA及lncRNA测序。通过mRNA测序,发现了差异表达基因tpsb2、gzme、megf10、ifi202b、cpa3与免疫反应相关,spock3、ccl20、chodl、tpsab1与细胞因子相关,gzme、esm1、ifi202b与细胞表面受体信号通路相关,其中tpsb2、mcpt2、ifi202、esm1、upk1b、ivl、foxc2可能在干细胞转化中起重要作用。通过lncRNA测序,发现已知lncRNA的GO富集分析未富集到生物学过程,因此提示ADSCs与SSCs在lncRNA层面上差异不显著。此外,还发现部分差异表达的lncRNA目前尚无功能研究。