论文部分内容阅读
目的:通过高脂饲料联合STZ腹腔注射建立T2DM大鼠模型,在此基础对黄连温胆汤各剂量组治疗T2DM大鼠的药效学作用进行比较研究,筛选治疗糖尿病时黄连温胆汤中黄连的最佳剂量,观察其对肝脏脂代谢PPARα-LXRα-ABCA1信号通路的影响,初步探讨其对改善T2DM脂代谢紊乱的作用机制及作用靶点。为其后续深入研究和临床合理应用提供科学依据。方法:雄性SD大鼠100只,随机分为空白对照组(Normal)10只与造模组90只,分别予普通饲料及高脂饲料连续喂养4周后,造模组大鼠腹腔注射STZ溶液30mg/kg;正常组腹腔注射同等剂量0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。72h后,禁食不禁水12h,尾静脉采血测定空腹血糖(FPG),凡空腹血糖值≥11.7mmol/L者即为造模成功。将模型复制成功60只大鼠随机分成6组:模型组(T2DM)、温胆汤黄连低剂量组(黄连5g)、温胆汤黄连中剂量组(黄连10g)、温胆汤黄连高剂量组(黄连15g)、黄连组(10g)、盐酸二甲双胍片组(阳性对照)。各给药组分别依次按照如下剂量7.25g·kg-1、7.75g·kg-1、8.25g·kg-1、1g·kg-1、0.05g·kg-1灌胃给药,空白对照组、模型对照组给予同体积蒸馏水。给药期间,除空白对照组予以普通饲料外,其余组均给予高脂饲料喂养,共计治疗4周,每周固定时间测量大鼠体重及空腹血糖。末次给药后禁食12h,测定体重、血糖,全自动生化分析仪检测大鼠血清脂类相关指标:TC、CHO、LDL、HDL;试剂盒法测定糖尿病大鼠肝脏组织抗氧化能力相关指标即GSH、MDA、GSH-PX、SOD;HE染色镜下观察空白对照组、模型对照组、黄连组、黄连温胆汤黄连最佳剂量组大鼠肝脏组织形态学变化;运用RT-PCR和Western Blot方法检测以上四组大鼠肝脏组织中PPARα、LXRα及ABCA1蛋白表达。结果:给药物后,与模型组大鼠比较,空白组、黄连组、温胆汤黄连低剂量组、温胆汤黄连中剂量组、温胆汤黄连高剂量组大鼠体重均显著升高(P<0.01),空白组及各给药组大鼠血糖与模型组大鼠血糖比较均显著降低;与模型组比较,各给药组均可显著降低大鼠血清中TG含量(P<0.01);阳性对照组、黄连组及黄连温胆汤黄连最佳剂量组可显著降低血清中CHO含量(P<0.01,P<0.05),除阳性对照组外,各给药组均可显著升高大鼠血清中HDL含量,除温胆汤黄连低剂量组外,各给药组均可显著降低大鼠血清中LDL含量(P<0.01);与空白组比较,模型组大鼠肝组织中SOD及GSH-PX的活力、GSH的含量均显著降低(P<0.01、P<0.01,P<0.05)、MDA的含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组均能显著增强大鼠肝组织中SOD的活力;与模型组比较,黄连组、阳性药、温胆汤黄连高剂量组、温胆汤黄连中剂量组均可显著降低大鼠肝组织中MDA含量(P<0.01、P<0.05、P<0.05、P<0.05);阳性对照组、黄连组、温胆汤黄连高剂量组均能显著升高大鼠肝组织在GSH的含量(P<0.05),各给药组均可显著提高大鼠肝组织中GSH-PX的活力(P<0.01),HE染色后发现,空白对照组大鼠肝脏细胞排列紧密,边缘清晰;模型对照组肝脏细胞边缘模糊,细胞核固缩或消失,肝板细胞排列混乱。黄连温胆汤黄连最佳剂量组(温胆汤加黄连10g组)肝细胞与模型对照组比较,肝细胞排列较整齐,细胞内脂肪滴、炎性浸润减少。RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,T2DM模型组大鼠肝组织中PPARα、LXRα、ABCA1mRNA表达均显著降低(P<0.05、P<0.05、P<0.05);与模型组比较黄连组与黄连温胆汤黄连最佳剂量组均可显著升高PPARα、LXRα以及ABCA1在大鼠肝脏组织中的表达(P<0.01,P<0.05)、(P<0.01,P<0.05)、(P<0.05,P<0.01)。Western Blot 结果显示,与空白对照组比较,T2DM模型组大鼠肝脏组织中PPARα及LXRα蛋白相对表达均有所下降,具有统计学意义(P<0.05),ABCA1蛋白相对表达无显著变化。与T2DM模型组大鼠比较,黄连组及黄连温胆汤黄连最佳剂量组大鼠肝脏组织中PPARα、LXRα及ABCA1蛋白相对表达显著升高(P<0.05),且两个给药组肝脏组织中PPARα、LXRα及ABCA1蛋白相对表达含量无统计学差异(P>0.05)。结论:黄连温胆汤各剂量组均能有效纠正T2DM大鼠糖脂代谢紊乱;有效提高T2DM大鼠抗氧化应激能力,减轻糖尿病造成肝组织损伤;故通过我们前期实验基础结合方证相关理论认为本实验中温胆汤原剂量加10克黄连为最佳参考剂量。黄连温胆汤可通过激活肝脏脂代谢通路PPARα-LXRα-ABCA1改善T2DM模型大鼠脂代谢紊乱情况,有效提高大鼠抗氧化能力,从而减轻大鼠肝脏组织损伤。