论文部分内容阅读
99Tc-MDP(99Tc-methylenediphosphonate),即99Tc-亚甲基二膦酸盐注射液,商品名为云克,其有效成份为高锝[TC]酸钠注射液（A剂）和注射用亚锡亚甲基二膦酸盐冻干品（B剂）。99Tc-MDP利用微量元素的价态变化,通过失去或获得电子不断消除人体内的自由基,保护超氧化酶（SOD）的活力,抑制病理复合物的产生,防止自由基对组织的破坏。大剂量D-半乳糖所致的亚急性衰老模型是目前最为常用的制备衰老动物模型的方法。该模型具有寿命短、学习记忆障碍、神经系统退行性变、免疫力和繁殖力下降等多种衰老表现,在国内外被广泛应用于衰老机理研究以及抗氧化剂、延缓衰老药物的药效学评价。VitE具有抗机体过氧化损伤及免疫防御的作用。因此本实验选取VitE作为阳性对照组,D-半乳糖制备衰老动物模型,来研究99Tc-MDP是否具有抗衰老作用。目的:以D-半乳糖衰老小鼠为研究对象,通过观察给药前后小鼠体重、行为学、胸腺指数、脾脏指数、脑切片的变化,以及测量小鼠血清和肝组织、脑组织、心脏及肾脏中SOD、MDA、GSH-PX、MAO活性及含量,来确定99Tc-MDP是否具有抗衰老作用及探寻其可能的作用机制,从而为拓展99Tc-MDP的临床应用及研发新型的抗衰老药物提供理论指导和实验依据。方法:48只健康雌性昆明种小鼠,随机分为6组:正常空白对照组、模型组、维生素E组、99Tc-MDP低、中、高剂量组。（1）模型组:每天颈背部皮下注射10%的D-半乳糖0.25ml/20g,20分钟后灌胃0.85%的灭菌生理盐水,0.2ml/10g,连续42d。（2）空白对照组:每天颈背部皮下注射同剂量的生理盐水,20分钟后灌胃0.85%的灭菌生理盐水, 0.2ml/10g,连续42d。（3）99Tc-MDP三个剂量组:每天颈背部皮下注射10%的D-半乳糖0.25ml/20g,连续42d,20分钟后高剂量组1.4×10-3μg99Tc/20g,中剂量组7.0×10-4μg99Tc /20g、低剂量组3.5×10-4μg 99Tc /20g99Tc-MDP注射液腹腔注射,隔天给药一次,共21天。（4）VitE阳性组:每天颈背部皮下注射10%的D-半乳糖0.25ml/20g,20分钟后灌胃VitE植物油溶液0.2ml/10g,连续42d。学习记忆能力测试（跳台实验和LASHLEY水迷宫实验）后,从小鼠眼眶取血约1ml,血样以3000r/min离心15min后留上层血清待测。断头处死小鼠后迅速取出大脑、心脏、肝脏、肾脏,用冰冷的生理盐水冲洗血渍,吸干表面水分测重。再取部分脑组织用生理盐水制成10%的脑匀浆,3500r/min离心15min后取上清液待测。心脏、肝脏、肾脏用同样的方法分别制成组织匀浆,备用。同时取出新鲜胸腺、脾脏吸干表面水分测重,计算脏器指数〔脏器指数=脏器重量（mg）/动物重量（g）〕。10%的甲醛固定剩余的脑组织,石蜡包埋,5μm厚切片,60℃烘烤过夜,以备HE染色。结果:①6周后模型组小鼠脊椎隆起,体形消瘦,皮肤松弛,毛色灰暗稀疏,行动迟缓。模型组与空白组相比,小鼠血液SOD活性明显降低（P<0.01）,说明本实验D-半乳糖组小鼠实验动物可作为衰老模型组使用。VitE组与模型组相比,小鼠血液SOD明显升高（P<0.01）,说明本实验中阳性对照组具有对照作用,同时进一步证明本实验小鼠衰老模型可作为衰老模型组使用。②跳台实验,模型组比正常组潜伏期缩短（P<0.01）,犯错误次数增多（P<0.01）;与模型组比较,VitE组和99Tc-MDP各剂量组均能显著延长潜伏期（P<0.01）,减少犯错误次数（P<0.01）;③LASHLEY水迷宫实验,模型组比正常组潜伏期延长（P<0.01）,犯错误次数增多(（P<0.01）; VitE组和99Tc-MDP各剂量均能缩短潜伏期（P<0.01）,减少犯错误次数（P<0.01）。④与空白组比较,模型组小鼠胸腺和脾脏萎缩（P<0.01或P<0.05）;VitE组和99Tc-MDP各剂量组与模型组比较,胸腺指数和脾脏指数明显增高（P<0.01或P<0.05）。⑤99Tc-MDP低、中、高剂量组和VitE组对D-半乳糖致衰老小鼠血清,心脏,肝脏,肾脏,脑组织中SOD活性、GSH-PX活性的降低有明显升高作用（P<0.01或P<0.05）,对MDA含量及MAO含量有降低作用（P<0.01或P<0.05）。⑥模型组切片海马区细胞数目减少,层次减少,结构模糊,部分细胞体积减小,细胞核形态改变。VitE组和99Tc-MDP三个剂量组神经元的改变接近正常组,海马区细胞变性坏死均减轻,细胞数目形态正常,结构清晰。结论:99Tc-MDP能保护机体免受自由基的损伤,增强免疫力进而发挥抗氧化作用,延缓衰老,对于预防和治疗老年病可能具有较好的潜在的开发和应用前景。