目的观察火针疗法对脑梗死模型大鼠不同时间窗行为学、脑梗死体积百分比、脑血管内皮细胞形态结构、自噬过程关键蛋白表达的影响,从而探讨火针疗法改善脑梗死后大脑神经功能的作用机制。方法采用Excel随机法将150只SD大鼠随机分为假手术1d、3d、7d组;模型1d、3d、7d组;火针1d、3d、7d组,火针组及模型组采用改良自体血栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型。火针组采用贺氏细火针,针刺百会、曲池、合谷、足三里、太冲穴,假手术组和模型组不予治疗性干预。之后在相应时刻对各组大鼠进行Longa行为学评分;采用TTC染色法全脑染色后拍照记录,对图像应用Image-Pro Plus 6.0软件测量并计算梗死体积百分比;采用光镜及透射电镜技术观察各组大鼠血管内皮细胞微观形态及超微结构变化;采用Western blot检测自噬发生蛋白(PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ、AKT)的表达。结果(1)行为学评分:假手术组评分结果显示均为0分,即无神经功能损害症状;与之相比,模型组大鼠神经功能Longa评分在三个时间点均明显升高,差异具有统计学意义(P=0.000<0.05),出现对侧肢体屈曲、无力,行走时向对侧转圈、倾倒等神经缺损症状,随时间推移在3d和7d时评分逐渐降低,但差异无统计学意义;火针组Longa评分随时间推移出现明显下降,且与模型组比7d时明显降低,差异有统计学意义(P=0.015<0.05)。(2)脑梗死体积百分比:假手术组脑染色均显示无白色梗死区;与之相比,模型组与火针组大脑梗死区域明显可见,模型组梗死体积百分比随时间推移,在3d和7d时出现一定程度的增长趋势,但差异无统计学意义;火针组梗死区百分比在3d和7d时也有小幅增长,且三个时间点梗死百分比均小于模型组,但差异无统计学意义。(3)血管内皮细胞微观形态及超微结构:假手术组大鼠脑血管内皮细胞连接紧密而有序,呈完整无缝的带衬于血管内壁,细胞光滑呈梭形,细胞膜完整,胞浆丰富透亮,细胞器成分完整,细胞核大,核膜完整,核浆比例较小,核仁明显;模型组大鼠血管内皮细胞从血管内壁脱落,排列无序,聚集于管腔内,细胞肿胀,形态异常,胞膜完整性破坏,细胞器严重损害、丢失,细胞核肿胀,但随时间推移出现一定程度变化:聚集程度减轻,细胞及细胞核肿胀程度减轻,胞膜完整性逐渐恢复,细胞核、细胞器均有一定程度恢复;火针组大鼠经过火针治疗性干预后,血管内皮细胞形态基本恢复成梭形,胞膜完整性恢复,受损细胞器成分和细胞核均有改善,并逐渐恢复。(4)自噬发生情况:透射电镜观察显示火针组血管内皮细胞自噬发生情况明显,且在3d和7d时数量明显增加。大脑中动脉栓塞1d后,与假手术组比较,模型组PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白均有所增高,且随时间推移表达量增高更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),提示这些蛋白在大脑中动脉栓塞后被激活,表明自噬参与并贯穿于急性脑梗死发生动态过程中;火针疗法干预1d至3d后,自噬发生蛋白PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ均明显升高,趋势一直持续至7d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论火针疗法可促进脑梗死大鼠神经功能恢复,其机制可能与上调自噬发生蛋白PI3KC3、Beclin-1、LC3Ⅱ的表达,调控血管内皮细胞自噬发生,进而改善血管内皮细胞损伤有关。