PTTG在脑胶质瘤中的表达及靶向PTTG的siRNA表达载体的构建

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自Pei在鼠垂体瘤中发现PTTG以来,广泛的研究表明,PTTG在正常组织中不表达或者表达量很低,而在多种人类肿瘤中均有高表达。还有研究显示在转染了反义PTTG的肿瘤细胞,其PTTG的表达有明显下降,因而PTTG可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。我们通过免疫组化方法检测了人脑正常组织和胶质瘤组织PTTG蛋白表达情况,结果发现:PTTG在正常脑星形细胞中表达不明显或不表达,而PTTG在胶质瘤细胞中广泛表达,尤其在高级别肿瘤中,且表达强度随肿瘤恶性程度增高而增强。PTTG在正常脑组织与低级别胶质瘤及高级别胶质瘤中表达两两比较呈正相关(p<0.01)。提示,PTTG极有可能是评价胶质瘤恶性程度预后判断的指标,并可能是胶质瘤新的治疗靶点。为了探讨RNA干涉对胶质瘤的影响,我们合成特异性干扰PTTG的小分子干扰RNA片段,并与pGenesil2载体连接,成功构建PTTG干扰载体(pGenesil2-PTTG siRNA)。利用脂质体成功将其转染U251细胞,应用RT-PCR法和流式细胞术对转染后U251中PTTG的mRNA和蛋白表达水平进行分析。结果显示,本研究成功构建了能高效率沉默PTTG的RNAi表达载体,表达载体可有效转染U251细胞,且高效地抑制了胶质瘤U251细胞中PTTG基因mRNA及其蛋白水平的表达。本研究为采用RNAi技术沉默胶质瘤中PTTG基因并为进一步研究其在胶质瘤中的作用奠定了前期基础。
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