肺癌是我国最常见、最普遍的癌症,其发病率和死亡率都位于众多肿瘤的前列。目前治疗癌症的化疗药物多是西药成分,而其严重的毒副作用制约着西药的使用,因此,中药多组分多靶点的研究日益受到重视。柘木是一种新兴的抗肿瘤药材,其药理功效广泛,广受研究者青睐,其药理研究范围也在扩大。现有研究已经明确,柘木对胃癌、肠癌、乳腺癌和肝癌等具有一定的治疗和缓解作用。尽管众多研究表明柘木能够抑制肿瘤细胞的生长,但关于柘木总黄酮对肺癌细胞的作用研究未有报道。本文通过优选柘木总黄酮的最佳提取工艺;采用D101大孔吸附树脂,探索其工艺流程,优化富集柘木总黄酮的方法;以LLC细胞作为研究对象,在体内探讨柘木总黄酮对肺癌小鼠的抗肿瘤活性,并进一步研究其作用机制,可以对后期临床试验提供指导。本文首先利用响应面法对柘木总黄酮的提取工艺进行优化。以柘木为原料、乙醇为提取溶剂,得到最优提取方案为乙醇体积分数90%,料液比1:16,提取时间116min,提取次数3次,在此提取条件下提取率可以达到3.33%,与理论预测值相对误差为2.63%。采用大孔吸附树脂,优选柘木总黄酮富集工艺。结果表明:pH4.5的上样液(1.88mg·mL-1)以流速1BV/h通过D101大孔树脂,树脂的上样量为6mL/g,2BV水洗,2BV20%乙醇洗脱,5BV75%乙醇洗脱,收集75%乙醇洗脱液。测定纯化后总黄酮的百分含量为66.24%。体内试验研究了柘木总黄酮对LLC肺癌小鼠的抗肿瘤活性。结果表明柘木总黄酮能够改善小鼠的体重,保护脾和胸腺等免疫器官,其中高剂量组显著抑制肿瘤的生长,抑瘤率高达67.04%。病理切片可见细胞核变小,核固缩,肿瘤细胞形态明显破坏,瘤组织内多见大范围坏死区及大量核碎裂,周围有炎性细胞浸润。最后ELISA法检测小鼠血清中TNF-α,IL-2,IL-6和IL-12细胞因子的含量,与模型组相比,柘木总黄酮给药组均能提高其含量,提示柘木总黄酮可能通过调节免疫功能,从而达到抗肿瘤作用。为了进一步探讨柘木总黄酮抗肿瘤作用机制,采用UPLC法,对柘木总黄酮提取物成分做出指认分析,初步指认所含黄酮成分,化合物1为花旗松素,化合物2为柚皮素,化合物3为山奈酚。最后通过MTT法研究3个单体成分对LLC细胞是否存在抑制作用,测得OD值,确定其对LLC肺癌细胞的增殖抑制作用,探讨抗肿瘤作用机制。花旗松素在浓度0.156-5mM范围内抑制LLC细胞增殖,且呈浓度依赖性,IC50值约为0.45mM。柚皮素在浓度12.5-200μM范围内抑制LLC细胞增殖,且呈浓度依赖性,而12.5μM和25μM对细胞增殖没有显著的影响,IC50值约为0.43mM。山奈酚在浓度12.5-200μM范围内抑制LLC细胞增殖,且呈浓度依赖性,而12.5μM对细胞增殖没有显著的影响,IC50值约为60μM。Western Blot检测山奈酚对LLC细胞自噬蛋白LC3,p62的影响,GFP-LC3观察自噬情况,流式细胞仪定量检测MDC荧光强度,结果均表明山奈酚可能诱导LLC肺癌细胞自噬。