人癌胚抗原转基因小鼠的建立

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转基因动物技术的出现是20世纪生物技术领域中的重大事件,而生物技术将是21世纪的支柱产业之一,是经济和科技发展的关键技术。转基因技术使人们能从整体、器官、细胞、分子多层次,从发育时间和组织生理空间多角度,立体多维地研究基因,并可按人类的意愿改造和修饰物种。 癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是胚胎发展中产生的抗原之一,是一种最常见的肿瘤相关抗原,是目前国际上公认的肿瘤标记物。其基因定位于人类19号染色体长臂(19q13.1~13.2),分子量约为180kd,为免疫球蛋白超家族的成员。CEA在正常消化道黏膜仅少量分泌,而90%的消化道恶性肿瘤、胰腺癌,70%非小细胞肺癌和50%乳腺癌有CEA的高表达,故CEA可作为这些肿瘤检测和治疗的靶分子。 本实验以小鼠为研究对象,用显微注射法将包含小鼠乳清酸蛋白基因启动子(约2.4kb)、人癌胚抗原的编码序列(约2.1kb)及polyA信号的转基因构件转入原核期小鼠胚胎,制备了CEA转基因小鼠,旨在研究CEA与乳腺癌等肿瘤发生、发展的关系,为以后制作小鼠乳腺生物反应器提供经验和参考。主要进行了以下工作: 提纯pWA-CEA质粒,分别进行HindⅢ单酶切、HindⅢ和Xho Ⅰ双酶切、SacⅡ和KpnⅠ双酶切鉴定。对构建成功的pWA-CEA质粒用SacⅡ和KpnⅠ双酶切得到目的基因(约4.9kb),胶回收并纯化目的片断,溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,pH7.4;0.2mmol/L EDTA)中,注射用DNA浓度为3μg/ml,储存-20℃备显微注射用。将雌鼠做超排卵处理,与正常雄鼠交配,取其受精卵,培养至单细胞双原
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