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目的本课题旨在从理论上阐明“肾虚肝实”是免疫性不育的基本病机，采用同种异体主动免疫法建立雄性大鼠免疫性不育疾病模型，观察调免毓麟汤对模型大鼠精液参数、睾丸组织结构、精液酸性磷酸酶、睾丸生精细胞凋亡、大鼠睾丸bcl-2、bax表达以及雄鼠抗精子抗体(AsAb)转阴率、配对雌鼠妊娠率的影响，初步揭示免疫性不育的病理机制和调免毓麟汤的治疗机理。方法①本实验在120只3月龄SD雄性大鼠中随机取10只作为正常对照组，另取60只大鼠给予双侧腹股沟皮下淋巴结周围、颈背部脊柱两侧皮下六个部位各注射抗原进行免疫，7天后于上述相同部位加强免疫，分别于初次免疫前及每次加强免疫后断尾取血10ul，分离血清，用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清AsAb。经过四次免疫后，有57只大鼠血清AsAb为阳性。将57只抗精子抗体阳性大鼠按随机数字表法随机分为模型组、醋酸强的松组、调免毓麟汤低剂量组、调免毓麟汤中剂量组、调免毓麟汤高剂量组分别灌胃给药。其中正常组及模型组灌服生理盐水，调免毓麟汤各剂量组灌服调免毓麟汤煎剂，醋酸强的松组灌服醋酸强的松溶液，均每日一次，连续30天。②观察调免毓麟汤对模型大鼠精液参数影响，分别在光镜和透射电镜下观察睾丸组织形态学变化。③采用酸性磷酸酶(ACP)试剂盒检测大鼠精液ACP，测定调免毓麟汤对模型大鼠精液ACP活性的影响。④用流式细胞仪检测实验各组大鼠生精细胞凋亡情况。⑤采用免疫组织化学法检测实验各组大鼠睾丸组织凋亡相关基因bcl-2、bax的表达情况。⑥统计调免毓麟汤对模型大鼠AsAb转阴率以及与配对雌鼠合笼后的妊娠率和胚胎数。结果①模型大鼠精液参数变化：模型大鼠精子密度、活率、直线运动速度等精液参数显著下降，与正常组及各治疗组比较有极显著性差异(P＜0.01)；醋酸强的松组大鼠精液参数与调免毓麟汤中、高剂量组比较有显著性差异(P＜0.05)。②睾丸组织显微、超微结构观察：光镜下可见模型组大鼠睾丸曲细精管萎缩，管腔内上皮变薄，部分生精细胞核固缩、变性，间质水肿，部分间质细胞空泡变性。调免毓麟汤各剂量组与醋酸强的松组睾丸组织各级生精细胞增加，曲细精管结构趋于完整，其睾丸组织的病理损害均有不同程度的修复，调免毓麟汤中、高剂量组较之醋酸强的松组的修复作用更好。透射电镜观察可见模型组睾丸支持细胞与各级生精细胞的损伤最严重：支持细胞胞浆内出现大量空泡，各级生精细胞核周间隙增宽，线粒体肿胀，精子细胞少见。治疗组对于睾丸支持细胞与各级生精细胞的损伤均有修复作用，调免毓麟汤中、高剂量组能明显减轻生精细胞的受损程度。③模型大鼠精液ACP活性变化：模型组大鼠精液ACP活性显著下降，与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)；醋酸强的松组ACP活性与调免毓麟汤中、高剂量组比较有极显著性差异(P＜0.01)；调免毓麟汤中、高剂量组间比较无显著性差异(P＞0.05)。④模型大鼠睾丸生精细胞凋亡数、凋亡率测定：模型组大鼠睾丸生精细胞出现大量凋亡细胞，醋酸强的松组凋亡细胞数及凋亡率低于模型组，两者比较有极显著性差异(P＜0.01)；调免毓麟汤低剂量组与醋酸强的松组比较差异不显著(P＞0.05)；调免毓麟汤中、高剂量组与醋酸强的松组比较有极显著性差异(P＜0.01)。⑤模型大鼠睾丸组织凋亡相关基因表达情况：与正常组比较，模型组大鼠睾丸组织bcl-2蛋白表达下降，bax蛋白表达上升；与模型组比较，调免毓麟汤中、高剂量组大鼠睾丸组织bcl-2蛋白表达显著上升，bax蛋白表达显著下降。⑥实验各组大鼠AsAb转阴率及与配对雌鼠合笼后胚胎数、妊娠率的统计：治疗第30天，调免毓麟汤各剂量组与醋酸强的松组比较有显著性差异(P＜0.05)，调免毓麟汤各剂量组之间比较差异不显著(P＞0.05)；统计妊娠率及每胎胚胎数显示，调免毓麟汤各剂量组与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)；调免毓麟汤各剂量组与醋酸强的松组比较有显著性差异(P＜0.01)。结论本课题提出了“肾虚肝实”是免疫性不育基本病机的观点，根据中医基本理论阐释了免疫性不育的发病机理。通过实验研究发现，调免毓麟汤能显著提高模型大鼠精子密度、活率及直线运动速度，对睾丸组织的病理损害具有良好的修复作用；调免毓麟汤高剂量组能显著提高模型大鼠精液ACP的活性，从而抑制AsAb的产生，提高生育力；调免毓麟汤中、高剂量组能显著降低模型大鼠生精细胞凋亡率，提高模型大鼠各级生精细胞数量；调免毓麟汤能上调抑凋亡基因bcl-2蛋白的表达，下调促凋亡基因bax蛋白的表达；调免毓麟汤能使模型大鼠AsAb转阴，调免毓麟汤各剂量组妊娠率、每胎胚胎数均高于醋酸强的松组及模型组。免疫性不育的病机责之于肾虚肝实，而虚实夹杂是其特点。根据《内经》“虚则补之，实则泻之”的原则，调免毓麟汤紧扣“肾虚肝实”病机，以补益肾气，清利湿热，活血化瘀立法，共奏肾肝同治，补泻兼施之功，从而起到纠正免疫紊乱、恢复正常免疫功能的作用。调免毓麟汤通过在不同环节和机制上发挥作用，能使免疫性不育大鼠血清AsAb转阴，显著提高模型大鼠的生育力。其功效也反证了免疫性不育“肾虚肝实”病机理论的科学性。