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研究背景:宫腔粘连(IUAs)是指创伤、感染等各种原因所致子宫内膜基底层损伤后,宫腔部分或全部粘连。近年研究表明,子宫内膜纤维化是IUAs的主要病理学特征,是其本质。叉头框F2(FoxF2)是器官发育、细胞外基质合成、上皮-间质细胞转化中的重要转录调节因子,参与了多种器官的纤维化过程。FoxF2在IUAs的作用尚未见文献报道。雌激素是存在于女性体内的最主要性激素,在IUAs治疗中常作为经验性治疗被临床广泛应用,但因疗效不一、基础研究缺乏,其应用剂量仍存在广泛争议。本实验拟探讨FoxF2在IUAs中的表达及不同浓度雌激素对IUAs纤维化进程和FoxF2表达的影响。第一章FoxF2在宫腔粘连细胞模型中的表达及意义目的:探讨FoxF2在IUAs细胞模型中的表达。方法:1.原代培养人子宫内膜基质细胞(HESCs)。2.免疫细胞化学法进行细胞鉴定。3.建立IUAs细胞模型:用0和10ng/ml转化生长因子β1(TGF-β1)分别作用于HESCs 48 h作为对照组和模型组。4.实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(WB)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原I(COLI)及FoxF2的mRNA和蛋白表达。结果:1.原代培养的HESCs形态稳定,生长活性好。2.免疫细胞化学法检测细胞波形蛋白表达阳性,且波形蛋白阳性细胞比率高,而角蛋白18表达阴性,证实为HESCs,且纯度高。3.与对照组相比,模型组α-SMA、COLI及FoxF2的mRNA和蛋白表达均显著性增高(P<0.05)。结论:1.10ng/mlTGF-β1可诱导HESCs向肌成纤维细胞转化,引起纤维化标志物α-SMA和COLI的表达稳定性增加,从而建立IUAs细胞模型。2.FoxF2在IUAs中高表达,提示FoxF2可能参与IUAs纤维化进程。第二章雌激素对宫腔粘连纤维化进程及FoxF2表达的影响目的:探讨不同浓度雌激素对IUAs纤维化进程及FoxF2表达的影响。方法:1.配置10-6、10-8 10-10、10-12mol/L的雌激素工作液。2.本实验分为5组,分别为模型组、10-6mol/L E2组、10-8mol/LE2组、10-10 mol/L E2组、10-12 mol/L E2组。先用 10 ng/ml TGF-β1作用于HESCs 48 h以建立IUAs细胞模型,再用上述不同浓度雌激素作用于该模型中48 h。3.qPCR和WB法检测α-SMA、COLI及FoxF2的mRNA和蛋白表达。结果:1.qPCR 结果:与模型组相比,10-6、10-8、10-10mol/LE2 组 α-SMA、COLI、FoxF2mRNA 表达均下降(10-10mol/LE2组 COLI:P>0.05,其余各组P<0.05);10-12 mol/LE2组 α-SMA、COLImRNA 表达上升(P>0.05),FoxF2mRNA 表达下降(P<0.05)。2.WB 结果:与模型组相比,10-6、10-8、10-10 mol/LE2组 α-SMA、COLI、FoxF2蛋白表达均下降(P<0.05);10-12 mol/LE2组α-SMA蛋白表达上升(P>0.05),COLI和FoxF2蛋白表达均下降(P<0.05)。结论:17β-雌二醇可在一定范围内下调α-SMA和COLI的表达,逆转IUAs纤维化进程,并抑制FoxF2的表达。