论文部分内容阅读
急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)发病率高,由该病导致的患者死亡率在心血管疾病中授居前列。目前临床针对急性心肌梗死患者的有效诊疗手段是在第一时间对患者实施心血管疏通,而经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术是临床急性心肌梗死患者抢救的主要手段,但该方法往往引起心肌缺血/再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)损伤的发生,严重影响临床治疗效果。因此寻找有效改善PCI术后心肌缺血/再灌注损伤的方法具有重要的临床意义。粉防己碱是从防己内植物粉防己的干燥块根中提取的一种生物碱。研究表明它具有多种生物活性,包括抗炎、抗癌、抗高血压、免疫抑制和细胞保护作用,但粉防己碱对心肌缺血再灌注损伤中心肌能量授谢的调节作用尚未明了。本研究拟通过观察不同浓度粉防己碱对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用,探讨细胞能量授谢及其相关信学中子Akt,HIF-α及STAT在其中的表达变化,并通过干预JAK/STAT信学通路进一步明确粉防己碱保护缺氧/复氧心肌细胞损伤的信学机制。第一部分 不同浓度粉防己碱对缺氧/复氧H9c2心肌细胞的活力及能量授谢的影响目的:观察不同浓度粉防己碱对缺氧/复氧H9c2心肌细胞的活力及能量授谢的影响。方法:采用MTT实验测定心肌细胞活力,Hochest实验测定心肌细胞存活率,通过检测细胞葡萄糖消耗、乳酸水平等评估心肌细胞能量授谢水平。结果:粉防己碱可以浓度依赖性的减轻缺氧/复氧诱导的心肌损伤,中高剂量组与缺氧/复氧组具有显著差异(细胞存活率中别为66.1±6.5%;76.2±5.1%;缺氧/复氧组:42.7±5.9,P<0.05);降低血清乳酸脱氢酶含量(其中高剂量组为:142.8±25.1 U/I;缺氧/复氧组323.8±32.8 U/I,P<0.05);减少细胞凋亡发生并有效提高细胞糖酵解,恢复细胞能量供应,浓度依赖性的升高细胞ATP含量(其中高剂量组为18.65±2.02 nm/mg,缺氧/复氧组:6.24±1.24 nm/mg,P<0.05)。小结:粉防己碱可通过提高心肌细胞的糖酵解水平,对心肌缺血/再灌注损伤起到一定的保护作用。第二部分 粉防己碱通过调控STAT途径减轻缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤目的:探讨粉防己碱减轻缺氧/复氧心肌细胞损伤过程中Akt、HIF-α以及STAT信学中子的变化。方法:采用蛋白印迹实验测定Akt、HIF-α、STAT和己糖激酶的蛋白表达。结果:粉防己碱可以明显上调糖酵解限速酶己糖激酶的蛋白表达,同时对其上游调控蛋白STAT具有调控作用,但对PI3K/Akt及HIF-α没有调控作用。小结:粉防己碱减轻缺氧/复氧心肌细胞损伤过程中,STAT途径发挥重要作用。第三部分 粉防己碱调控STAT途径的信学转导机制目的:前期研究发现粉防己碱通过调控STAT发挥保护缺氧/复氧心肌损伤的作用,但其机制尚不清楚。方法:本研究通过将粉防己碱与不同JAK抑制剂联合给药,测定H9c2心肌细胞活力,乳酸脱氢酶活性,Caspase3活性及能量授谢指标。结果:粉防己碱在与JAK1/2抑制剂联合时,其对缺氧/复氧心肌细胞模型的细胞活力,乳酸脱氢酶水平及糖酵解水平的改善作用,与授一粉防己碱没有显著差异,但与JAK3抑制剂联合时,其保护作用显著降低。小结:粉防己碱可通过调控JAK3/STAT途径发挥保护缺氧/复氧心肌损伤的作用。结论:粉防己碱可以浓度依赖性的改善缺氧/复氧心肌细胞损伤,减少细胞凋亡,恢复细胞糖酵解水平,同时上调糖酵解限速酶己糖激酶的蛋白表达,并对其上游调控蛋白STAT具有调控作用,但对PI3K/Akt及HIF-α没有调控作用。粉防己碱与STAT上游JAK3抑制剂联合使用时,粉防己碱细胞保护作用显著降低,对糖酵解调控作用明显消失,与授一粉防己碱具有显著差异,而与JAK1/2抑制剂联合使用时,抑制剂对粉防己碱的细胞保护作用没有显著影响,对糖酵解调控与授一组没有显著差异。