小鹅瘟肠道损伤机制的研究与VP3基因重组腺病毒的构建

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小鹅瘟是一种由鹅细小病毒引起的急性或亚急性败血性传染病。典型的小鹅瘟表现为心包积水、肝炎和心肌炎,其最典型病变是在肠道发生纤维素性败血性肠炎。目前,免疫接种仍然是防制小鹅瘟的重要措施。国内外常用的小鹅瘟疫苗为弱毒疫苗,尽管弱毒疫苗对小鹅瘟的防控起到了关键性作用,但这类疫苗仍存在许多不足。本试验为探讨小鹅瘟病毒对雏鹅肠道损伤的机制,应用实时荧光定量PCR法检测了雏鹅肠组织中COX-2、iNOS、NF-κB、IL-1β和TNF-α的mRNA表达量。同时通过同源重组法将小鹅瘟病毒VP3基因与复制缺陷型人5型腺病毒载体重组,构建小鹅瘟新型活载体疫苗。实验结果表明:1.小鹅瘟感染后,雏鹅肠组织中COX-2、iNOS、NF-κB、IL-1β和TNF-α mRNA表达量均显著升高,特别是在回肠和空肠中上升的幅度最明显。表明GPV感染能上调炎症因子的表达,引起鹅肠道炎性损伤。2.成功构建重组穿梭载体pShuttle-CMV-VP3,同源重组获得重组腺病毒质粒pAD-VP3,在HEK293细胞中成功包装腺病毒载体疫苗rAD-VP3;通过PCR与Weston-blot鉴定了重组病毒在HEK293细胞中表达。3.将重组腺病毒疫苗在小鼠体内进行免疫效力试验。用间接ELISA法测定小鼠血清抗体效价,一免后抗体效价可达1:51200,证明重组病毒可以诱发小鼠产生特异性免疫。综上所述,本研究表明炎症因子COX-2、iNOS、NF-κB、IL-1β和TNF-α参与了小鹅瘟患鹅肠道炎症损伤过程。构建的小鹅瘟病毒VP3基因新型腺病毒疫苗在小鼠体内可以产生特异性免疫反应,为进一步开发小鹅瘟基因工程疫苗提供了一些启示。
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