世界上第一个被发现的miRNA是在1993年在线虫中发现。时隔7年,2000年在人体中也发现了 miRNA的存在,到目前为止已经有2000多种miRNA被报道能够调控基因的表达。miRNA是一种长度为19-24个nt的单链RNA,通过结合到靶基因mRNA的3’-UTR区域在转录后水平调控基因的表达,已经被预测与分化、发生、发展、代谢及凋亡等等大量生物进程相关。miRNAs与肿瘤相关的研究也是日益增多。本实验选取了骨巨细胞瘤中的RANK以及肺癌中的Ral作为靶点,分别研究miR-129和miR-215在各自肿瘤中的作用,了解这些miRNAs在其肿瘤的生物学进程中的所扮演的角色,对于寻找肿瘤早期诊断及治疗的新靶点有着积极的作用。在第一部分中,我们以骨巨细胞瘤作为对象。骨巨细胞瘤一种常见的原发性中间性骨肿瘤。我国是骨巨细胞瘤的高发国家,原发性骨肿瘤中有20%都是骨巨细胞瘤。骨巨细胞瘤目前的治疗以外科手术治疗为主,但是针对难以手术切除以及术后复发的骨巨细胞瘤,仍缺少一种安全、副作用下、适用性广的治疗方法。我们希望通过miRNA来解决这个问题。我们使用miRNA芯片技术检测2个瘤旁组织和4个骨巨细胞瘤组织的miRNA表达谱,找出了其中有显著性表达差异的miRNA,并使用生物信息学软件预测了在RANK的3’-UTR端存在结合位点的miRNA,从中筛选出了 miR-129作为研究对象。转染miR-129 mimic后在蛋白水平验证miR-129对RANK的调控。但是目前未取得进展,拟调整实验来进一步验证。在第二部分中,我们以肺癌为研究对象。肺癌是恶性肿瘤中发病率和死亡率最高的。目前肺癌的治疗手段主要有手术治疗、化疗、放疗及靶向药物等,但是疗效一般,肺癌的死亡率依然居高不下。我们希望通过miRNA找到新的治疗靶点。在这个实验中,我们通过查阅相关资料,发现在多种肺癌组织中,Ral家族蛋白都呈现高表达的情况,选定为研究靶点。向目标细胞系中转染Ral的过表达质粒,再通过功能实验验证Ral家族在肺癌中的功能。使用targetscan网站预测相关的miRNAs。通过将预测可能的miRNAsmimic转染入肺癌细胞,在蛋白水平验证各种miRNA对Ral家族的影响,从中筛选出对Ral家族调控作用最为明显的miR-215,将其作为主要的研究对象。接着通过Luciferase实验在细胞水平验证了 miR-215能够和Ral家族的mRNA的3’-UTR直接结合从而影响Ral家族的表达。之后通过CCK8、EdU、FCM、Transwell等的回复实验,验证了 miR-215 通过调控 Ral 家族的表达从而调节肺癌的增殖、侵袭等生物进程,为肺癌的治疗提供了新的思路及实验依据。